[发明专利]一种日本鳗鲡转录因子c-Rel基因启动子及其应用

说明书

本发明涉及一种日本鳗鲡转录因子c‑Rel基因启动子及其应用。通过c‑Rel基因开放阅读框第一外显子序列比对分析日本鳗鲡基因组，对分析预测的c‑Rel基因5’侧翼区序列进行降落PCR方法克隆获得日本鳗鲡转录因子c‑Rel基因启动子序列，并成功构建了c‑Rel基因启动子pGL3‑c‑Rel‑pro荧光素酶重组载体。实验证明c‑Rel基因启动子可被LPS和嗜水气单胞菌诱导激活，并且发现重要信号通路炎症调控因子Caspase‑1能够显著上调c‑Rel基因启动子的荧光素酶活性。本发明可为研究日本鳗鲡转录因子c‑Rel基因的表达调控机制以及重要鱼类炎症相关NF‑κB信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统，同时也可以利用该启动子构建表达载体后高效表达外源基因，或将该启动子应用于转基因鱼的构建，具有重要的理论和实际意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及日本鳗鲡转录因子c-Rel基因启动子及其应用。

背景技术

细胞核转录因子kappaB(NF-κB)是细胞中重要的转录调控因子，通过对多种抗菌肽、细胞因子、生长因子、粘附因子以及免疫相关酶的基因表达调控，参与机体炎症反应和免疫调节，并在细胞增殖、分化、凋亡等方面发挥重要作用。

NF-κB家族有5个成员，分别为NF-κB1(p50)、NF-κB2(p52)、Rel-A(p65)、Rel-B和c-Rel。NF-κB/Rel家族蛋白的共同特征是在N端都包含有一个RHD结构域(Rel-homologydomain)。RHD结构域与蛋白的二聚化、DNA结合以及与抑制蛋白IκB(inhibitor of NF-κB)互作等功能相关(Zhang,Q.,M.J.Lenardo and D.Baltimore(2017).30Years of NF-κB:ABlossoming of Relevance to Human Pathobiology.Cell168(1):37-57.)。当细胞受到TNFα、IL-1β等细胞因子、细菌脂多糖LPS、病毒蛋白、细菌和病毒特有的DNA或RNA、过氧化酶、蛋白激酶、紫外线及X射线刺激后，经过不同信号通路的信号传导最终激活并引起不同NF-κB/Rel蛋白之间的同源二聚化或异源二聚化，进入细胞核对免疫相关基因表达进行调控(Wan,F.and M.J.Lenardo(2010).The nuclear signaling of NF-KB:currentknowledge,new insights,and future perspectives.cell Research(1):24-33.)。