[发明专利]一种四指马鲅三倍体的培育方法

说明书

本发明公开了一种四指马鲅三倍体的培育方法，包括：热休克处理步骤：将受精后2‑8min的受精卵置于温度为39‑43℃孵化用水中进行热休克处理1‑3mi n；孵化步骤：将经过热休克处理的受精卵移至孵化桶中培育三倍体鱼苗；该培育方法形成三倍体的效率高，鱼苗品质好，为成鱼养殖提供了前提条件。

技术领域

本发明涉及一种四指马鲅三倍体的培育方法，属于育种技术领域。

背景技术

四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum),隶属鲈形目，马鲅科，四指马鲅属，为浅海底栖鱼类，其肉质细嫩鲜美，生长迅速快，是我国名优海水经济鱼类。四指马鲅的养殖群体未经培育，近年来，亲鱼老化及近亲繁殖问题突出，养殖过程中出现了抗逆、抗病能力差，养殖成活率低等显现，有些养殖成活率甚至不到10％。此外，该鱼性成熟时间早，导致生殖能耗加大，一定程度上影响了生长性能。

多倍体指生物体体细胞中含有超过2个染色体组的个体。相对于二倍体，多倍体含有三个或更多的染色体组。多倍体鱼尤其是三倍体具有生长速度快、配置好、抗逆性强等优点，在鱼类遗传育种中具有重要的地位。目前，鱼类多倍体的诱导方法主要有温度休克、药物处理、静水压、杂交等。其中药物处理法诱导成功率低，很多诱导剂毒性较大，有致癌性，且价格昂贵；静水压法处理则需要静水压仪，设备成本较高，且样本容量有限；种间杂交的方法诱导多倍体，则周期较长、诱导率较低。温度休克法(包括冷休克或热休克)诱导鱼类多倍体则具有操作简单、成功率高、育种周期短的优势，然而温度休克法并不适用于所有的鱼类，而且针对不同的鱼类，采用何种温度休克方式和条件是非常关键的。因此，开展四指马鲅三倍体诱导技术研究，生产马鲅三倍体苗种，对推动我国马鲅产业技术升级具有重要意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种四指马鲅三倍体的培育方法，其形成三倍体的效率高，鱼苗品质好，为成鱼养殖提供了前提条件。

实现本发明的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种四指马鲅三倍体的培育方法，包括：

热休克处理步骤：将受精后2-8min的受精卵置于温度为39-43℃孵化用水中进行热休克处理1-3min；

孵化步骤：将经过热休克处理的受精卵移至孵化桶中培育三倍体鱼苗。

进一步地，热休克处理步骤中受精卵的获取方式为：选取性腺发育成熟的四指马鲅雄鱼和雌鱼，麻醉后分别采集精液和成熟卵子；将精液与卵子混合，加入海水激活精子，进行人工受精，得到受精卵。

进一步地，采集精液和成熟卵子的方法为：挑选体重1.5-2.5kg性腺发育成熟的四指马鲅雄鱼和雌鱼，缓慢转移至含有丁香酚的塑料箱中麻醉；分别包裹雄鱼和雌鱼眼睛，擦干腹部和生殖孔周围，轻压鱼腹部，分别将精液、卵子挤入干燥洁净的烧杯中。

进一步地，精液与卵子混合方式为：将精液与卵子按照体积比1:100混合，用毛笔尖轻轻搅拌30s混合。

进一步地，加入精液与卵子混合物10倍体积的海水激活精子。

进一步地，海水的温度为29-33℃，盐度27-30‰。

进一步地，热休克处理步骤中，受精后3min的受精卵置于温度为42℃孵化用水中进行热休克处理2min。

进一步地，孵化步骤中，孵化的温度为29-32℃，pH为7.8-8.1。

进一步地，孵化步骤中，孵化的条件为溶解氧6.0mg/L，氨氮0.10mg/L。

进一步地，孵化步骤中，孵化的条件为盐度27-30‰，亚硝酸盐0.005mg/L。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1、本发明四指马鲅三倍体的培育方法的三倍体率达到53.3％，对应孵化率为36.36％，其三倍体的形成效率高；