[发明专利]活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记及鉴定方法

说明书

本发明公开一种活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记及鉴定方法，DNA分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，鉴定方法按照如下步骤进行：采集光棘球海胆管足，提取光棘球海胆DNA；以所得到的DNA为模板，进行PCR反应，所述PCR反应上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；所述PCR反应体系为模板30~100ng，2XPCRmix10µL，上游引物2µmol，1µL，下游引物2µmol，1µL，灭菌水补至20µl；所述PCR反应程序为98℃变性30s；98℃变性10s、60℃退火15s、72℃延伸1min、进行30个循环；72℃后延伸5min；4℃保存PCR反应产物；对PCR反应产物进行电泳检测，扩增出长度为405bp特异性条带的为雌性个体，否则为雄性个体。

技术领域

本发明属于水产养殖性别鉴定技术领域，尤其涉及一种活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记及鉴定方法。

背景技术

光棘球海胆（ Strongylocentrotus nudus）是重要的海水养殖品种，市场价值极高，性腺组织是其唯一可食用部分。近年来，巨大的市场需求推动了养殖产业的发展，也导致了野生资源的衰退，培育优良品种及实现性控育种是目前海胆养殖产业的难题。然而，光棘球海胆不具备明显的性别二态性，在其生长发育的各个阶段都无法从外观分辨性别，这严重阻碍了光棘球海胆良种培育和单性群体养殖的进程。目前，海胆性别鉴定方法大多数需要解剖获得性腺，通过组织学切片或基因表达定量分析，无法满足活体鉴定的要求。DNA分子标记是活体性别鉴定的重要工具，不受发育时期、环境等因素的限制，使用PCR操作技术即可实现鉴定，具有操作简单快速、结果准确等优点。但是，迄今为止并没有基于DNA分子标记进行光棘球海胆活体性别鉴定的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记及鉴定方法。

本发明的技术解决方案是：一种活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记，核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示。

一种基于上述的活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记的鉴定方法，其特征在于按照如下步骤进行：

a. 采集光棘球海胆管足，提取光棘球海胆DNA；

b. 以所得到的DNA为模板，进行PCR反应，所述PCR反应上下游引物

的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2 和SEQ ID NO：3所示；所述PCR反应体系为模板30~100ng，2XPCRmix10µL，上游引物2µmol，1µL，下游引物2µmol，1µL，灭菌水补至20µl；所述PCR反应程序为98℃变性30s；98℃变性10s、60℃退火15s、72℃延伸1min、进行30个循环；72℃后延伸5min；4℃保存PCR反应产物；

c.对PCR反应产物进行电泳检测，扩增出长度为405bp特异性条带的为雌性个体，否则为雄性个体。

本发明只需采集少量光棘球海胆的管足组织，即可实现活体性别鉴定，准确率达100%，采集管足后个体的生长状态及存活率与对照组相比无明显差异，具有操作简单、快速及可信度高等优点。

附图说明

图1是本发明实施例样本的PCR反应产物进行电泳检测结果图。

图2是本发明实施例样本性腺组织学判定结果图。

具体实施方式