[发明专利]一种测定蔬菜中硒形态含量的方法

说明书

本发明公开一种测定蔬菜中硒形态含量的方法，所述方法使用离子对反相高效液相色谱‑紫外‑氢化物发生‑原子荧光光谱法测试待测样品中的硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒脲、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸、亚硒酸根和硒酸根7种硒形态和含量。本发明的测定方法无机硒提取加入碘乙酰胺，解决了HPLC‑HG‑AFS中分析测试亚硒酸根回收率差的问题；前处理操作快速、简便，蛋白酶所需种类少且用量少，试剂成本低，样品提取率高，大大提高了硒形态HPLC‑HG‑AFS分析方法的灵敏度和分离度；一次可同时分析测定7种硒形态含量，且仪器分析测试时间短。

技术领域

本发明属于质量检测技术领域，具体涉及一种测定蔬菜中硒形态含量的方法。

背景技术

硒作为一种人体必需的营养元素，人体内各种活性酶的重要组成成分，被世界卫生组织和中华医学会定为二十一世纪继碘、锌后必补的第三大微量营养保健元素。硒在预防克山病、增强免疫力、抗氧化、防癌抗癌、护肝、保心、促进脑力发育、防治糖尿病、调节内分泌与维生素吸收与利用、保护甲状腺和前列腺等方面均发挥着重要作用。

硒在生物体内的生物利用度、有效性、毒性以及代谢等不仅与硒的总量有关，更与硒赋存形态密切相关。农产品中硒的常见形态主要分为无机硒和有机硒。无机硒，如硒酸盐、亚硒酸盐，毒性较大，在人体中吸收和利用率低，长期摄入易导致人体病变。有机硒，如硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸等，经生物转换而得，生物活性强，易被人体所吸收和利用，安全无副作用和营养价值高。可以说，硒的赋存形态真正决定了硒在生物体内的可利用价值和营养价值。硒在不同食物中的结合形式和形态种类均不同，有的以蛋白结合态为主，有的与多糖类结合为主，这样就导致不同样品的硒提取释放方法不一。此外，不同种类的样品需要的酶种类不同，不同酶的提取量、提取温度等条件亦不同，因此很难形成针对所有样品统一的硒形态前处理方法。

食品中硒形态分析方法有高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)法、高效液相色谱-串联三重四级杆质谱(HPLC-MS-MS)法、体积排阻色谱(SEC-HPLC)法、气相色谱-电感耦合等离子体质谱(GC-ICP-MS)法、毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱(CE-HPLC-ICP-MS)法、高效液相色谱-原子荧光光谱(HPLC-HG-AFS)法等。液相色谱硒形态分离多为离子交换(AE)法和离子对(IP)法，离子对试剂多为三氟乙酸、七氟丁酸和己烷磺酸等，罕见以四丁基溴化铵为离子对试剂分离硒形态的报道。目前，关于食品中硒形态HPLC-AFS分析方法的报道不多，样品类型主要集中于富硒酵母、大米、食用菌和水产品等，且主要方法HPLC-ICP-MS法，但是HPLC-ICP-MS法测硒时存在质谱干扰严重，需要较为丰富的分析测试经验，且其运行成本和购置成本显著较高。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于现有技术中对蔬菜中硒的形态和含量检测灵敏度差，分析时间过长的缺陷，从而提供了一种测定蔬菜中硒形态含量的方法，具体为离子对反相高效液相色谱-紫外-氢化物发生-原子荧光光谱法(IP-RP-HPLC-UV-HG-AFS)。

为此，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种测定蔬菜中硒形态含量的方法，所述方法使用离子对反相高效液相色谱-紫外-氢化物发生-原子荧光光谱法测试待测样品中的硒代胱氨酸(SeCys₂)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒脲(SeUr)、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、亚硒酸根(Se(IV))和硒酸根(Se(VI))7种硒形态和含量，根据硒形态保留时间确定形态，峰面积确定含量。

进一步地，包括如下步骤：

S1：取1份待测样品加入碘乙酰胺溶液，使用超声波提取后过滤上机测试，测定亚硒酸根的形态和含量；

S2：取另外1份待测样品，加入水后超声破壁，再加入蛋白酶使用超声波提取后过滤上机测试，测定除亚硒酸根以外硒的形态和含量。