[发明专利]人源化CD37和双特异性CD19-人源化CD37 CAR-T细胞

说明书

本发明涉及含本发明的人源化CD37‑CAR。本发明还涉及双特异性CD19‑人源化CD37CAR，包括：(i)CD19Vsubgt;L/subgt;，(ii)人源化CD37ScFv，(iii)CD19Vsubgt;H/subgt;，(iv)跨膜结构域，(v)至少一个共刺激结构域，和(vi)激活结构域。本发明的CAR在血液系统肿瘤的过继免疫基因治疗领域中是有用的。

技术领域

本发明涉及人源化CD37 CAR和双特异性CD19-人源化CD37-CAR和CAR-T细胞，它们在血液系统肿瘤的过继免疫基因治疗领域中是有用的。

背景技术

免疫疗法正在成为一种非常有前途的癌症治疗方法。T细胞或T淋巴细胞是我们免疫系统的武装力量，不断寻找外来抗原并将异常(癌症或经感染细胞)和正常细胞区分开来。利用CAR(嵌合抗原受体)构建体对T细胞进行基因修饰已成为设计肿瘤特异性T细胞最常见的方法。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者体内(称为过继细胞转移或ACT)是一种有效的免疫治疗方法[1,2]。与化疗或抗体相比，CAR-T技术的优点在于经重新编程的工程化T细胞能在患者体内实现增殖和持续存在(“一种活的药物”)[1,3]。

CAR通常由在N-末端部分的单克隆抗体来源的单链可变片段(scFv)、铰链、跨膜结构域和若干胞内共刺激结构域：(i)CD28，(ii)CD137(4-1BB)、CD127或其它共刺激结构域，与CD3-ζ结构域串联组成(图1)[1；2]。CAR的演变经历了从第一代(无共刺激结构域)到第二代(有一个共刺激结构域)再到第三代CAR(有两个共刺激结构域)和第四代(有若干个共刺激结构域)。具有多个共刺激结构域的CAR(所谓的第三代CAR)增强了细胞毒性CAR-T细胞活性，显著改善CAR-T细胞的持久性，从而增强其抗肿瘤活性。

CAR的结构示于图1。左侧：第一代(无共刺激结构域)结构，中间：第二代(一个共刺激结构域CD28或4-1BB)，右侧：第三代CAR(两个或若干个共刺激结构域)。该图来自Golubovskaya,Wu,Cancers,2016[3]。

CD19和CD37抗原

CD19是一种已知的在B细胞恶性肿瘤(诸如白血病和淋巴瘤)中过表达的抗原。CD37是跨膜四蛋白(或跨膜4超家族(TM4SF)蛋白)家族蛋白中的成员，该家族蛋白具有四个潜在的跨膜区，CD37在白血病和淋巴瘤患者中也过表达[4]。

发明内容

为了提供新的免疫肿瘤的治疗方法，本发明提供了一种人源化CD37 scFv，其包括具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，人源化scFv具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列。

此外，本发明提供了嵌合抗原受体(CAR)，其包括：

(i)权利要求1所述的人源化CD37 ScFv，

(ii)跨膜结构域，

(iii)至少一个共刺激结构域，和

(iv)激活结构域。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。

此外，本发明提供了双特异性CAR，其包括：

(i)具有SEQ ID NO:5的氨基酸的CD19 V_L，

(ii)权利要求1所述的人源化CD37 ScFv，

(iii)具有SEQ ID NO:6的氨基酸的CD19 V_H，

(iv)跨膜结构域，