[发明专利]一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法，属于中药技术领域，采用UPLC‑MS/MS法同时测定细辛中马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D、马兜铃酸Ⅲ及马兜铃酸Ⅶa含量的方法，专属性更强，控制成分更多，且对不同药用部位进行全方位测定分析，从而对药材质量的进行更全面的评估，对细辛药材的合理应用提供依据。

技术领域

本发明涉及一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法，具体的，涉及一种同时测定细辛中马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D、马兜铃酸Ⅲ及马兜铃酸Ⅶa六种成分含量的测定方法，属于中药技术领域。

背景技术

马兜铃酸(Aristolochic acid，AA)为硝基菲类化合物，主要存在于马兜铃属植物中。因马兜铃酸具有强烈的致癌性，2003年以来，我国药品监管部门先后取消了青木香、关木通、广防己、天仙藤、马兜铃等药材的质量标准，《中国药典》2020年版一部中仅收录了细辛。细辛为马兜铃科植物北细辛、汉城细辛或华细辛的干燥根和根茎，标准中采用HPLC法对其中的马兜铃酸Ⅰ(即马兜铃酸A)进行了限量检查。

马兜铃酸为一类物质，研究发现马兜铃酸A、B均具有致突变作用，且马兜铃酸B的致突变作用强于马兜铃酸A。另外马兜铃酸D也很可能是马兜铃酸中具有遗传毒性的成分。因此，测定任何单一成分不足以全面衡量药材毒性，使其使用存在一定的安全隐患。建立一种能同时检测多种马兜铃酸类成分的方法，对此类药材质量和安全性控制将具有重要的意义。

关于药材中马兜铃酸类成分测定的分析方法，已经有很多研究报道，主要采用反相高效液相色谱法(RPLC)和高效液相串联质谱法(HPLC-MS)，但对入药率最高的细辛无相关报道，且主要集中于马兜铃酸I、II等个别成分。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法，能够同时测定马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D、马兜铃酸Ⅲ及马兜铃酸Ⅶa的含量，从而对药材质量的评估更全面。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法，采用UPLC-MS/MS法同时测定药材中马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D、马兜铃酸Ⅲ及马兜铃酸Ⅶa含量的方法。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述药材为细辛。

本发明技术方案的进一步改进在于：分别配制混合对照品溶液和供试品溶液，精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱质谱联用仪，测定，外标法计算含量，即得。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述对照品溶液的配制方法为：取马兜铃酸A、B、C、D、Ⅲ及Ⅶa对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中各含10～50ng的混合对照品溶液，即得。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述对照品溶液为加甲醇制成每1ml中各含50ng的混合对照品溶液。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述供试品溶液的配制方法为：取供试品粉末，过四号筛，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30～60分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述供试品溶液的配制过程中超声处理30分钟。

本发明技术方案的进一步改进在于：色谱条件为：

色谱柱：Water C₁₈柱1.7μm 2.1×50mm；

以乙腈为流动相A，0.1％～0.2％甲酸为流动相B，采用梯度洗脱，

0～7min，流动相A：28％，流动相B：72％；