[发明专利]一种利用魔芋花粉离体培养获得单倍体植株的方法

权利要求书

1.一种利用魔芋花粉离体培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、魔芋雄花获得及消毒处理：

S11、选择4龄优质开花的花魔芋，在花药未散粉前取下雄花段，将雄花段在2~6℃下预处理1~2天，得到预处理雄花段；

S12、将步骤S11得到的预处理雄花段进行消毒处理，消毒完成后，干燥，得到消毒雄花段；

S2、催粉和花粉愈伤组织诱导：

将步骤S12得到的消毒雄花段，在无菌条件下切割成小段，将小段接种到愈伤组织诱导培养基中诱导培养3~5天，使雄花散粉，然后利用暗培养-光培养手段培养2个周期，得到愈伤组织；

所述暗培养-光培养手段1个周期的具体实施步骤为：先在25~27℃下暗培养10~15天，接着在25~27℃下光培养10~15天；

所述光培养时采用普通光进行照射，光照强度为1500~2000Lx，光照时间为10~12h/d；

所述愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基+NAA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.5g/L；

S3、分化培养：

在无菌条件下，将步骤S2得到的愈伤组织转入分化培养基中，采用白光-红蓝光手段培养5个周期，使得愈伤组织分化产生不定芽，不定芽分化、生长，即得到魔芋组培苗；

所述分化培养基为MS基本培养基+KT 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L；

上述步骤S2中诱导培养、暗培养-光培养环节以及步骤S3分化培养环节均在密闭培养容器中进行；

所述白光-红蓝光手段1个周期的具体实施步骤为：先在25~27℃，普通光照下培养5天，接着于25~27℃，红蓝光照下培养2天；

所述普通光照培养时的光照强度为3500~4500Lx，光照时间为14~16h/d；所述红蓝光照培养时的红蓝光比例为2:1，光照强度为1000~1500Lx，光照时间为12~16h/d。

2.根据权利要求1所述的利用魔芋花粉离体培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，步骤S2中，所述愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8；步骤S3中，所述分化培养基的pH值为5.8。

3.根据权利要求1所述的利用魔芋花粉离体培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，步骤S2中，所述诱导培养时采用普通光进行照射，光照强度为4000~5000Lx，光照时间为14~16h/d，温度为27~29℃。

4.根据权利要求1所述的利用魔芋花粉离体培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，步骤S12中，所述消毒处理过程的具体方法为：先将步骤S11得到的预处理雄花段水洗10~20min，接着用75%酒精浸泡30~50s，然后用次氯酸钠浸泡8~10min，最后用无菌水冲洗3~5次。