[发明专利]一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法

权利要求书

1.一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

A：芽孢菌种的活化处理，首先将菌种融化分散，然后取少量菌种悬液滴入至营养肉汤内，进行培养后直至得到第三代芽孢菌种悬液；

B：芽孢菌种的繁殖，无菌吸取适量第三代芽孢菌种悬液，接种至营养琼脂培养基上，置于培养箱内繁殖数天；

C：芽孢的诱导生长，采用低温诱导的方式作用于繁殖后的芽孢菌种，促进芽孢生长。

2.根据权利要求1所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，进行培养得到第三代培养物的具体过程为，

a：取含有芽孢菌种的冻干管，在无菌操作下打开，使用毛细吸管吸取适量营养肉汤至冻干管中，轻柔吹吸数次，使芽孢菌种融化分散；

b：在冻干管中取10.0μl芽孢菌种悬液滴入至含有5.0～10.0ml营养肉汤的培养基试管中，培养后得到第一代芽孢菌种悬液；

c：取第一代芽孢菌种悬液，划线接种于营养琼脂平板培养基上，培养后得到第二代芽孢菌种悬液；

d：挑取第二代芽孢菌种悬液中的典型菌落，接种于营养琼脂斜面培养基上，培养后得到第三代芽孢菌种悬液。

3.根据权利要求2所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述第一、二、三代芽孢菌种悬液的培养条件均是将相对应的培养基置于37℃培养18～24h。

4.根据权利要求2所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：取第一代芽孢菌种悬液时，采用接种环进行沾取。

5.根据权利要求2所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述典型菌落为实际操作中面积较大、菌种较多的菌落。

6.根据权利要求1所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，芽孢菌种悬液的繁殖具体过程为，吸取第三代芽孢菌种悬液5ml，接种于含有营养琼脂培养基的罗氏瓶中并滴入至营养琼脂培养基的表面，摇动罗氏瓶使该芽孢悬液布满至培养基表面，然后将多余的菌液吸出，培养后得到大量繁殖的芽孢菌种悬液。

7.根据权利要求6所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：在吸取第三代芽孢菌种悬液时，在无菌环境中进行。

8.根据权利要求6所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述罗氏瓶内的芽孢悬液的培养条件是，将罗氏瓶置于37℃培养箱内培养3天。

9.根据权利要求1所述的一种枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，低温诱导的方式为，从培养箱内取出繁殖数天的芽孢菌种，置于4℃冰箱中，培养2～3天。