[发明专利]一种犬用犬血清去蛋白眼睛凝胶及其制备方法

说明书

本发明提供一种犬用犬血清去蛋白眼睛凝胶及其制备方法，所述犬血清去蛋白提取物的提取方法，简单有效，可以克服牛血清提取物中存在很多牛源的蛋白、多糖、糖肽等成分的缺陷，同时不需要添加任何外源的化学试剂或者其他成分，因此不含有外源的蛋白或者杂质，而且可以有效的去除内毒素对患宠的影响，提高患宠的接受性，增强治疗效果。本发明提供的犬用眼用凝胶是专门针对患犬使用的眼用凝胶，由于其主要成分为犬血清去蛋白提取物，因此不会产生排斥性或者其他的过敏反应，提高治疗效果。

技术领域

本发明生物医药技术领域，具体地说，涉及一种犬用犬血清去蛋白眼睛凝胶及其制备方法。

背景技术

DECB眼用凝胶最先由瑞士Solco制药研发生产，商品名素高捷疗(solcoseryl)，于欧洲市场率先上市。素高捷疗眼膏是一种凝胶状的滴眼液，呈透明状，适用于眼干燥症及结膜、角膜溃疡或损伤。该滴眼凝胶是由小牛血提取物、凝胶基质及防腐剂组成。小牛血提取物含有小分子肽、氨基酸和无机盐。该眼药能促进眼部创伤愈合，对中轻度眼干燥症患者，能起到润湿、润滑和营养的作用。

素高捷疗眼用凝胶自80年代进入我国，在临床上广泛应用。宠物眼科疾病近年激增，临床眼用制剂销量一直占据宠物用药前几位，需求很大，我国尚无宠物厂家生产此类眼膏，并且受欧洲疯牛病的影响，此类产品进口困难，价格昂贵。现在常见的生产眼用凝胶的主要原料为小牛血去蛋白提取物。小牛血去蛋白提取物，是一种从小牛血中分离提取得到的小分子生物活性物质，具有组织细胞修复及增殖作用，可广泛用于各种原因造成的皮肤、角膜溃疡、褥疮、烧伤、皮肤移植、伤口糜烂的愈合。但是由于牛血清提取物中存在很多牛源的蛋白、多糖、糖肽等成分，在具体宠物的应用时，会造成宠物的过敏反应，严重的甚至会造成休克或者死亡，严重影响了上述药物在宠物治疗中的应用。而且由于牛可能携带疯牛病、口蹄疫等多种病毒，会给后续的宠物治疗带来临床应用的安全隐患。

此外，现有技术中利用牛或者胎牛血液制备去蛋白提取物的方法虽然很多，但是并不适宜于宠物的治疗过程中，而且现有的小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法基本都为化学提取法，在提取过程中或多或少的都会引入外源的蛋白或者杂质，这会更加剧宠物治疗过程中的排斥和抵触。此外，在后续的纯化步骤中主要为离心、乙醇除蛋白、酸解酶解除蛋白、超滤除大分子物质等过程。但目前公知技术中很难最大程度的去除蛋白和保留活性物质，会造成产品质量不稳定，批次之间差距较大，影响产品的疗效，难以形成模范化的治疗标准。

在中国专利CN200910246717.3公开的一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液及其制备方法，在制备过程中需要加入枸橼酸钠、胃蛋白酶酶解、枯草杆菌蛋白酶、乙醇、木糖醇和ε-聚赖氨酸。这样的方法不仅复杂，而且需要加入大量的化学物质，从而破坏了小牛血去蛋白提取物的纯净性。

在中国专利CN200410013643中使小牛血去蛋白提取物溶液中的氨基酸、小肽可聚合成大分子量的肽及高分子肽，使药品产生抗原性并降低了药品的生物活性，引起临床过敏反应增加。这种方法制备的产品并不能用在目的是降低过敏反应的宠物治疗领域，而且虽然其技术难度小，易于生产，但很难将杂质，特别是蛋白完全去除，影响了产品纯度，从而危害患者健康甚至生命。

在中国专利CN200610080520中公开了另一种小牛血去蛋白提取技术，利用真空旋转蒸发仪减压除乙醇、酶水解、离心、葡聚糖G15凝胶层析脱盐和DEAE-Sephadex-50凝胶层析分离，最后膜滤除并紫外线灭菌。该方法所用酶水解除蛋白条件剧烈，破坏了更多的活性物质，使得产品生物活性降低，难以实现较好的治疗效果。

因此，本领域亟需一种利用简单、便捷的方法利用宠物动物的血液制备宠物动物来源的血清去蛋白提取物来代替昂贵的、含有外源杂质的牛血清，从而获得适合中国国情的宠物眼用凝胶，使之广泛的应用在宠物的治疗过程中。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取犬血清去蛋白提取物的方法。

所述方法具体为：