[发明专利]一种基于LFD-RMA法检测人腺病毒的引物探针组

说明书

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD‑RMA法检测人腺病毒的引物探针组，包括检测人腺病毒的引物对及对应的探针，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第31个碱基替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3‑spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。本发明所述试剂盒具有操作简单、灵敏度高、特异性强、与其他病原体无交叉反应、检测速度快等特点，为人腺病毒感染的早期诊断提供了可靠的实验依据。

技术领域

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD-RMA法检测人腺病毒的引物探针组。

背景技术

人腺病毒(adenovirus，ADV)是一种无外壳的双链DNA病毒，腺病毒感染可导致多种临床表现和疾病，包括呼吸道疾病(如普通感冒、支气管炎、肺炎等)、消化道疾病(如腹泻、胃肠炎等)、眼结膜炎、膀胱炎和神经系统疾病等。各年龄段人群均可感染人腺病毒，免疫系统较弱或慢性呼吸系统疾病、心脏病等患者感染后引发严重疾病的风险较高。且ADV也是目前造成婴幼儿肺炎死亡和致残的重要原因之一。人腺病毒传染性较强，常可引起暴发流行，因此快速、准确的检测技术对预防和控制腺病毒的传播有重要意义。

目前ADV的检测有病毒分离、血清学检测、分子生物学等方法。病毒分离和血清学检测操作繁琐、耗时长，且在病毒载量较低时，易造成漏检；分子生物学方法主要为荧光定量PCR法，需要相关的昂贵仪器设备且需要有专业技术人员操作，因此在基层和现场的检测应用受到很大限制。而重组酶介导扩增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技术，是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的等温核酸扩增技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37-42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平，可实现ADV的快速检测。

本发明采用LFD-RMA法建立快速检测人腺病毒的方法，为人腺病毒的现场检测提供一种快速、简单、可靠的新方法。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于LFD-RMA法检测人腺病毒的引物探针组，本申请是通过下述方案实现的：

一种基于LFD-RMA法检测人腺病毒的引物探针组，包括检测人腺病毒的引物对及对应的探针，其中，引物和探针序列为：

ADV-F：

5’-TAAGGCTAATGGCAATGGCGCAGGTGATAATGG-3’；

ADV-R：

5’-[Biotin]GGTTGTCAGATATTTCCACGTTGGTGGGGTTGT-3’；

ADV-P：

5’-[FAM]AGAAATTTCCTTTACTCCAATATTGCACTA[dSpacer]ACCTGCCAGACAAGCT[C3-spacer]-3’。

优选的，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第31个碱基替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3-spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。

一种基于LFD-RMA法检测人腺病毒的试剂盒，该试剂盒中包括有：含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水、侧流层析检测试纸条。

优选的，所述扩增反应试剂单管分装，为干粉形态，包括RMA引物对及检测探针组、重组酶、UvsY蛋白、单链结合蛋白、DNA聚合酶、核酸内切酶IV。