[发明专利]一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法

说明书

本发明公开了一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，调控溶液由1‑50微升/毫升放射菌酮组成。本发明采用上述的一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，操作简单，可以改善卵母细胞细胞周期的同期化，提高卵母细胞的质量，并显著提高受精效果。

技术领域

本发明涉及细胞周期调控技术领域，尤其是涉及一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法。可以广泛用于各种哺乳动物(包括人类)卵母细胞的体外成熟以及卵母细胞的长距离运输。

背景技术

动物的胚胎体外生产技术，也就是试管动物生产技术，主要包括卵母细胞的体外成熟、成熟卵母细胞的体外受精和体外受精后的胚胎体外培养三项部分组成。1978年世界上第一位“试管婴儿”的降生，这不仅为克服人类及哺乳动物的不孕与不育开辟了新的途径，而且也为在体外条件下研究观察卵母细胞的成熟，受精以及胚胎的发育提供了可能。因此，在过去的30多年里各种动物的胚胎体外生产技术有了飞速地发展。

但遗憾的是，30多年来动物胚胎体外生产的总效率并没有显著地提高，特别是在牛、羊和猪上。有很多因素可以影响动物体外胚胎的生产效率，如培养液的成份，培养条件与体内胚胎发育的条件相比还不完美、卵母细胞及精子的质量好坏等。但卵母细胞的质量不稳定是一个最主要的限制因素。卵母细胞的质量受细胞供体动物的影响很大，如品种、地理环境﹑营养条件、管理水平、季节、性周期等。不仅如此，由于卵母细胞主要来源于屠宰场废弃的动物卵巢上的卵泡，或是直接采自人类或活着动物卵巢上的卵泡。所以，这些卵母细胞在采集后处于不同的生长阶段，也就是说，这些细胞的发育阶段是不同期的，具有不同的发育潜力。另外，由于目前的成熟培养液，特别是激素的使用，使一部分卵母细胞在成熟过程中卵母细胞的核与质成熟不同期。一般情况下，卵母细胞细胞质的成熟往往要滞后于细胞核的成熟，即卵母细胞细胞核与质的成熟不同期，从而导致卵母细胞无法正常受精。综上所述，除了影响卵母细胞质量的外部因素以外，采集卵母细胞群体发育期的不同期和单个卵母细胞核与质成熟不同期是令全世界科学家伤脑的两大难题，同时也是制约动物卵母细胞成熟效率的主要因素。因此，解决这两大难题就意味着找到了提高动物体外胚胎生产效率的“金钥匙”。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，操作简单，可以改善细胞同期化，提高受精效果。

为实现上述目的，本发明提供了一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，其中，调控溶液由1-50微克/毫升放射菌酮组成。

优选的，一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，步骤如下：

S1、将40-50枚卵母细胞培养在含有500微升调控溶液中，进行培养；

S2、预处理的培养完成后，将卵母细胞转入正常的、不含放射菌酮，但添加促卵泡素(FSH)，促黄体素(LH)及雌二醇(E2)的成熟液中培养18-22小时，即可。

优选的，成熟液由M199培养液与10％体积的血清或牛血清白蛋白，或其它类似替代物组成。

优选的，成熟液中不含有FSH和LH激素。

优选的，培养条件为在38.5℃、5％CO₂的培养箱中培养22-24小时。

因此，本发明采用上述一种利用放射菌酮调控动物卵母细胞细胞周期的方法，具有如下技术效果：

(1)可以使卵母细胞的细胞周期同期化，同时改善单个卵母细胞的核和细胞质的同期化。与传统卵母细胞体外成熟方法相比，绝大多数卵母细胞经过CHX预处理后，到达成熟(马属动物第一次减熟分裂的中期，MI；其它哺乳动物包括人类，第二次减熟分裂的中期，MII)的时间明显提前。

(2)提高体外生产胚胎的总效率，改善胚胎质量，提高试管动物生产的总效率。