[发明专利]抗CK17蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人CK17抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案化学合成CK17蛋白C末端的410‑432位氨基酸为抗原肽，偶联KLH后得到免疫原。所述CK17‑KLH蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CK17蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株4D2,以及由该细胞株所分泌的抗CK17蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CK17蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CK17蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

细胞角蛋白在不同组织或器官的上皮细胞以及细胞分化的不同阶段表达不同型别的细胞角蛋白。在正常宫颈组织中有细胞角蛋白的表达，在正常宫颈组织向癌前病变或者浸润性肿瘤转化的过程中，一些细胞角蛋白会发生变化，并且表现出一定的规律性，这一特点表明细胞角蛋白具有显著的分子多样性，如：结直肠腺癌通常呈CK20阳性而CK7阴性；在基底样皮肤肿瘤的发生过程中，CK17可以发挥自身的免疫调节作用，进而促进上皮细胞的增殖和肿瘤的生长。

在正常宫颈组织向宫颈癌和癌前病变转化的过程中，CKs的表达会发生一系列变化并表现出一定的规律性，尤其是CK17的表达。Smedts等的研究结果显示,随着病变由CIN到浸润癌的改变，CK17的表达会逐渐增高，并由此认为病变表达CK17有可能进展，不表达则有可能消退或持续存在但并不进展。Carrilho等研究64例患者，其中正常10例，CINⅢ10例，宫颈浸润癌44例，结果CK17在其中的阳性表达率分别为0％、40％、73.2％，说明随着病变进展，CK17的表达增高，认为CK17是宫颈恶性转变的特异标志物。Ikeda等研究了134例患者，其中CINⅠ39例，CINⅡ31例，CINⅢ43例，浸润癌21例，结果CK17的阳性表达率分别为33.3％、58.1％、81.4％和95.2％，CK17阳性同CIN级别的增高相关联，认为CK17可能在筛查宫颈癌高危病例中发挥作用。王为民等的研究结果显示，从正常宫颈→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宫颈癌，随着病变程度的逐渐加重，CK17的阳性表达率逐渐增高，通过相关性分析，两者之间呈正相关关系，即宫颈病变程度越重，CK17的阳性表达率越高。由此可以认为，通过CK17的表达情况，可以预测宫颈病变未来的发展趋势，即表达CK17的宫颈病变，将来很有可能进一步发展，相反，不表达CK17的宫颈病变，将来进一步发展为宫颈癌的可能性很小。

此外，有研究表明在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中，CK17与口腔鳞状细胞癌患者的临床病理特点相关，且CK17高表达和口腔鳞癌患者预后显著相关，特别是与是否淋巴结转移显著相关，CK17阳性表达时淋巴结转移风险增加6倍，并且在接受手术和放疗的患者中，CK17低表达是早期疾病复发和疾病特异性死亡的独立标志物，CK17低表达的患者疾病复发风险比K17高表达风险增加了约4倍。研究结果表明：CK17和CK19很可能是一种潜在的预测OSCC患者预后的肿瘤标志物。

发明内容

发明人提供了一种抗CK17蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CK17蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2a亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 20762的杂交瘤细胞株产生。