[发明专利]含分子内佐剂的非洲猪瘟病毒重组蛋白、表达载体及应用

说明书

本发明涉及含分子内佐剂的非洲猪瘟病毒重组蛋白、表达载体及应用，属于生物技术制药领域，所述重组蛋白由非洲猪瘟病毒p30和mp54(修饰的p54)与铜绿假单胞菌的外膜蛋白I融合而成。所述的重组蛋白具有通式：OprI‑(Linker)n‑p30‑(Linker)n‑mp54。其中，所述连接肽Linker序列选自GGGGS或GGSGG，优选为GGGGS；n为1、2、3或4，优选为3。实验证明，该重组蛋白能够显著促进树突状细胞的成熟与分化及细胞因子的分泌。利用本发明重组蛋白制备的疫苗免疫动物可激发机体产生产生高水平的中和抗体以及细胞免疫应答，可用于非洲猪瘟病毒诊断试剂、预防或治疗性药物的制备。

技术领域

本发明属于生物技术制药领域，具体涉及一种含分子内佐剂的非洲猪瘟病毒重组蛋白、表达载体及应用。

背景技术

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swinefever virus, ASFV）引起的一种猪的急性烈性传染病，死亡率可达100%，目前尚无商品化的疫苗。该病于2018年8月传入我国，并迅速蔓延至我国三十多个省份和地区，造成直接经济损失达数百余亿元。目前ASF在我国仍呈现流行的态势，对我国的养猪业构成严重威胁，急需安全有效的疫苗用于防控该病。非洲猪瘟疫苗早期的研究经验表明：（1）灭活非洲猪瘟病毒作为疫苗不能诱导免疫保护；（2）减毒性活疫苗虽能诱导较好的免疫保护，但生物安全性较差。（3）多种非洲猪瘟病毒亚单位抗原能诱导部分免疫保护，且具有良好的生物安全性，为开发安全有效的非洲猪瘟疫苗提供了可能。随着对非洲猪瘟病毒保护性免疫应答研究的深入，非洲猪瘟亚单位疫苗的研究也已经取得了很大的进步，其中能够诱导高水平中和抗体和特异性细胞免疫的亚单位疫苗成为最具有发展前景的疫苗之一。

亚单位抗原由于成分单一，其免疫原性较差，从而诱导的免疫应答常不足以完全抵御病原体的入侵。一个设计合理的亚单位疫苗主要包括三种成分：亚单位抗原，递呈系统，以及佐剂。对于亚单位疫苗，由于传统佐剂缺乏特异性免疫的增强作用，因此提出了分子内佐剂的疫苗设计理念。因此，在亚单位免疫原中构建一种既具有靶向功能又具有传统佐剂免疫增强作用的内置佐剂，从而通过刺激具有抗原提呈作用的免疫细胞，提高亚单位免疫原诱导保护性体液免疫和细胞免疫的能力。OprI作为铜绿假单胞菌的一部分，其强大的免疫刺激能力受到密切关注，其可以通过TLR-2依赖途径刺激刺激树突状细胞的活化，促进抗原提呈分子（例如MHC分子）和共同刺激分子（例如CD40、CD80、CD86）的表达，以及炎性细胞因子(TNF-α和IL-12p70)的分泌。OprI作为一种有效的免疫佐剂，能够诱导强烈的混合型Th1/Th2免疫应答，在免疫调节和增强免疫应答的研究中已发挥重要作用。

发明内容

针对现有非洲猪瘟病毒亚单位疫苗免疫性差的问题，本发明的目的一在于提供一种重组蛋白OPM，目的二在于提供所述重组蛋白编码基因的表达载体，目的三在于提供所述重组蛋白在制备用于诊断或预防非洲猪瘟病毒的药物或试剂盒中的应用。所述重组蛋白OPM是将非洲猪瘟病毒亚单位抗原p30和mp54(修饰的p54)与铜绿假单胞菌外膜脂蛋白OprI串联形成，能够促进树突状细胞成熟和分化，激发机体产生更高水平的识别p30和p54的中和抗体和细胞免疫，有利于非洲猪瘟病毒感染的预防、诊断和治疗。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

一种重组蛋白，所述重组蛋白由非洲猪瘟病毒亚单位抗原p30、mp54和铜绿假单胞菌外膜脂蛋白OprI通过连接肽Linker融合而成，所述重组蛋白具有以下通式：OprI-(Linker)n -p30-(Linker)n-mp54；所述连接肽序列选自GGGGS、GGSGG中的一个，优选为GGGGS；n为1、2、3或4，优选为3。