[发明专利]含miR-124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了含miR‑124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用，属于中枢神经系统损伤修复药物技术领域。含miR‑124的胶质瘤细胞外泌体的制备方法，将胶质瘤细胞系培养得到的上清液经固液分离；将分离的外泌体和miR‑124混合，共同孵育，得到含miR‑124的胶质瘤细胞外泌体。上述制备的外泌体可有效与胆固醇修饰的miR‑124相结合并被反应性星形胶质细胞吸收，显著提升反应性星形胶质细胞中miR‑124表达，具有抑制星形胶质细胞活化及瘢痕形成的作用。因此，本发明还提供了含miR‑124的胶质瘤细胞外泌体在制备抑制星形胶质细胞活化和/或胶质瘢痕形成的药物中的应用，进而治疗中枢神经损伤疾病。

技术领域

本发明属于中枢神经系统损伤修复药物技术领域，具体涉及含miR-124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

星形胶质细胞(Astrocytes，As)是脊椎动物中枢神经系统中神经胶质细胞的主要组成部分。中枢神经系统损伤时，As活化为反应性星形胶质细胞(Reactive astrocytes,RAs)，合成和分泌以软骨素和硫酸角质素蛋白聚糖为主要成分的细胞外基质，与小胶质细胞、巨噬细胞等形成致密的胶质瘢痕，影响轴突的再生、延长和融合，并且压迫微血管，影响局部血液供应^[1]。RAs所形成的胶质瘢痕可形成物理屏障，阻碍移植细胞的迁移，导致利用神经干细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞等细胞治疗中枢神经系统损伤无法达到预期的效果。因此，如何抑制和消除RAs形成的胶质瘢痕成为治疗中枢神经系统损伤的重要科学难题。

miR-124是中枢神经系统中表达最丰富的miRNA，通过调节自噬、神经炎症、氧化应激、神经分化和线粒体功能等方面在诸多生理和病理过程中发挥着重要作用。已有证据表明，miR-124与中枢神经系统的损伤修复密切相关。Niina Vuokila等人发现脑损伤后mir-124后海马基因表达网络受到miR-124的长期调控，是脑损伤后基因表达的慢性调节剂^[2]。miR-124同时还可以调节活化的小胶质细胞的极化，并促使巨噬细胞向抗炎M2表型转变，并在脑部疾病后以多种方式保护神经元^[3]。在最近的研究中发现，miR-124与星形胶质细胞同样具有密切的联系，在氧-葡萄糖剥夺/再灌注后，星形胶质细胞中miR-124的表达明显降低，提升miR-124可以抑制星形胶质细胞的活化，促进损伤修复，这一发现为治疗中枢神经系统损伤提供了新的思路^[4]。在最近的研究中发现，miR-124与星形胶质细胞同样具有密切的联系，在氧-葡萄糖剥夺/再灌注后，星形胶质细胞中miR-124的表达明显降低，提升miR-124可以抑制星形胶质细胞的活化，促进损伤修复，这一发现为治疗中枢神经系统损伤提供了新的思路^[4,5]。

现需要解决的技术问题是：如何将miR-124高效地递送到CNS损伤部位，抑制星形胶质细胞活化并减弱胶质瘢痕的形成。寻找一个具有安全性，特异性和高效率的运输载体是将miR-124应用于临床实践的关键。