[发明专利]一种特异性白念珠真菌荧光染色液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，每1L特异性白念珠真菌荧光染色液中含有：粘附肽原液0.05～0.15g、链霉亲和素-荧光素复合物0.05～1g、渗透剂5～25g、稳定剂30～225g、抗猝灭剂0.5～25g。

2.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述粘附肽原溶液是由粘附肽粉末和含有二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液配制成的。

3.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述粘附肽原溶液中粘附肽的浓度为0.5～2mg/mL。

4.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述链霉亲和素-荧光素复合物为采用下述方法制得：

将荧光素溶于硼酸盐缓冲液A中，再加入碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，反应3～10min，调节溶液的pH值至8.0～8.5后加入链霉亲和素，混匀后持续反应1～3h；向所得的溶液中加入含5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液封闭5～20min终止反应，经离心、除去沉淀后，用硼酸盐缓冲液B在截留分子量100K的超滤离心管中洗涤得到链霉亲和素-荧光素复合物。

5.根据权利要求4所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明-异硫氰酸中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述稳定剂为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的特异性白念珠真菌荧光染色液，其特征在于，所述抗淬灭剂为丙三醇、抗坏血酸中的至少一种。

9.一种如权利要求1～8中任一项所述的特异性白念珠真菌荧光染色液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将粘附肽原液与链霉亲和素荧光素复合物，在室温下孵育10～40min，摇晃彻底，并进行避光保存，得到复合物溶液；

(2)将所得的复合物溶液、稳定剂、抗淬灭剂、渗透剂和水混合均匀后，定容至1L即得特异性白念珠真菌荧光染色液。

10.一种特异性白念珠真菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待测的含有微生物的样本稀释液移至载玻片中间区域，制片完成；

(2)将如权利要求1～8中任一项所述的特异性白念珠真菌荧光染色液滴加到样本稀释液进行覆盖，在25～37℃下孵育5～30min即可完成染色；

(3)取盖玻片直接加盖染色完成的载玻片，吸取多余液体；

(4)取样片载玻片于荧光显微镜下以400～600nm的波段进行观测白念珠菌群的形态及荧光强度。