[发明专利]兔出血症病毒重组抗原及其应用

说明书

本发明涉及一种兔出血症病毒重组抗原及其应用，兔出血症病毒重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的兔出血症病毒重组抗原由RHDV1和RHDV2的VP60蛋白序列组成并对特定位置的氨基酸进行了点突变，该蛋白的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高、免疫原性强，对兔类没有致病性，能够在兔类体内产生较强的体液免疫，免疫后的兔类能够抵御强毒攻毒，可供大规模批量生产，质控容易，生产成本低。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别是涉及一种兔出血症病毒重组抗原及其应用。

背景技术

兔病毒性出血症(Rabbit Hemorrhagic Disease，RHD)又名兔出血症，俗称兔瘟，是由兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus，RHDV)引起的兔的一种急性、烈性、高度传染性和高度致死性的疾病。经典的RHDV(RHDV1)主要侵害2月龄以上的家兔，发病率和死亡率高达90％，主要引起兔肝脏出血、坏死，实质器官水肿、淤血，并伴有呼吸系统出血等病变。2010年首次发现了RHDV新毒株，并将其命名为RHDV2型毒株，研究发现RHDV2型毒株对不同日龄的家兔均易感，且是唯一个能跨种传播的兔病毒属成员，并突破经典RHDV疫苗的免疫防线，迅速在世界范围内流行。RHDV2给家兔养殖业带来极大的潜在威胁和严重的影响，RHD亦被我国农业部兽医局列为二类动物疫病，也是OIE法定的通报动物疫病。

RHDV属于嵌杯病毒科兔病毒属，为无囊膜的单股正链RNA病毒，呈球形，直径为27～40nm。根据RHDV毒力差异可将其分为经典RHDV1型和RHDV2型。RHDV2型和经典RHDV1型二者病毒基因组结构相同，但核苷酸同源性仅为82.4％。RHDV病毒基因组分为ORF1和ORF2两个阅读框，ORF1位于基因组5’末端10～7041碱基位编码一个大的多聚蛋白前体，该蛋白可进一步水解为多个非结构蛋白和衣壳蛋白VP60；ORF2位于基因组3’末端7025～7378的碱基位编码另一个小蛋白VP10。VP60和VP10是RHDV的结构蛋白，其中VP60是组成病毒衣壳蛋白的唯一结构蛋白，也是病毒免疫保护性抗原，它在病毒诱导机体产生免疫反应的过程中起着非常重要的作用，同时由于VP60蛋白能够自我组装成病毒样颗粒，是RHDV新型疫苗的主要研究对象。

RHDV2临床症状与RHDV1毒株感染后相似，但在遗传特性和抗原性上有很大差异，用现有RHDV1疫苗不能有效预防家兔感染RHDV2。在已爆发2型兔病毒性出血症的国家多采用传统的灭活疫苗来防治RHDV2，但传统的灭活疫苗在灭活过程中可能损害有效的抗原决定簇，其产生的抗体水平维持时间较短，需要多次免疫，且灭活苗一定程度上也存在着散毒的潜在风险。因此，现亟需一种能够同时有效预防RHDV1和RHDV2感染的基因工程亚单位疫苗。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够同时有效预防RHDV1和RHDV2感染且安全高效、免疫原性强的兔出血症病毒重组抗原。

一种兔出血症病毒重组抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了一种核酸分子，其编码如上所述的兔出血症病毒重组抗原。

在其中一个实施例中，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了一种重组载体，所述重组载体含有如上所述的核酸分子。

在其中一个实施例中，所述重组载体为重组杆状病毒。

在其中一个实施例中，所述重组载体基于pFastBac1、pVL1393或pFastBac dual构建得到。

本发明还提供了一种宿主细胞，其基因组中掺有如上所述的核酸分子。

在其中一个实施例中，所述宿主细胞为Sf9细胞、High Five细胞或Sf21细胞。