[发明专利]一种检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括：以抗啶虫脒的特异性单抗和/或多抗组成的捕获剂、酶标二抗、样品稀释液、底物。本发明方案制备的试剂盒能够快速检测啶虫脒的浓度，检测程序简单方便，可同时检测多个样品，检测时间短，且灵敏度高。

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，尤其是涉及一种检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒及其应用。

背景技术

烟碱类农药是继有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类杀虫剂之后的一类重要杀虫剂，其主要通过选择性控制昆虫中枢神经系统烟碱型乙酰胆碱酯酶受体(nAChRs)，从而阻断昆虫中枢神经系统的正常传导，导致害虫出现全身麻痹进而死亡。啶虫脒是新烟碱类杀虫剂的代表性药剂，在农业生产上被广泛用于种子、叶面和土壤中多种害虫的防治，对蚜虫、叶蝉、烟粉虱、潜叶蛾等害虫防治效果较为理想，在烟草上主要用于烟蚜的防治。农药残留控制是产品质量安全控制的重要内容，是政府机构、生产企业及消费者共同关注的重点。啶虫脒近年来使用广泛，检出率高，屡有超限情况发生。

传统的检测方法虽然能够准确测定啶虫脒的含量，但需要专门的仪器设备，步骤繁琐，检测成本高，耗时长，样品需要经过复杂的预处理，需要专门的技术人员来完成，难以满足对环境及市场产品现场快速检测的要求。免疫检测是一种新型的检测方法，与传统检测方法相比，具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，能够快速检测农作物中啶虫脒的残留。

本发明还提出一种上述检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒的应用。

根据本发明第一方面实施方式的啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，所述试剂盒包括以抗啶虫脒的特异性单抗和/或多抗组成的捕获剂、酶标二抗、样品稀释液、底物。

在本发明的一些实施方式中，所述捕获剂为小鼠抗啶虫脒抗体IgG。

在本发明的一些实施方式中，小鼠抗啶虫脒抗体IgG用样品稀释液进行稀释，其稀释后的溶液为捕获剂。

在本发明的一些实施方式中，所述二抗为标记的兔抗啶虫脒抗体。

在本发明的一些实施方式中，所述标记酶标二抗的为HRP。

在本发明的一些实施方式中，所述HRP标记的酶标二抗用样品稀释液进行稀释后作为酶标二抗。

在本发明的一些实施方式中，所述啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，所述捕获剂附于固相支持物上。

在本发明的一些实施方式中，所述啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，所述固相支持物为酶标板或生物芯片。

在本发明的一些实施方式中，所述稀释液的组分为含体积分数为8％～12％FBS(小牛血清)的磷酸盐缓冲液。

在本发明的一些实施方式中，所述稀释液的组分为含体积分数为10％FBS(小牛血清)的pH7.4的磷酸盐缓冲液。

在本发明的一些实施方式中，所述啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，所述捕获剂与酶标二抗的用量比为1：(1～3)。

在本发明的一些实施方式中，所述啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒，所述捕获剂与酶标二抗的用量比为1：1。

在本发明的一些实施方式中，所述抗体的制备方法为：首次免疫采用抗原免疫，注射啶虫脒；首次免疫后进行加强免疫，共进行3～6次加强免疫，最后一次加强免疫后取血。

根据本发明的第二方面实施方式的上述检测啶虫脒的双抗夹心ELISA试剂盒的应用，所述应用为检测啶虫脒含量中的应用。