[发明专利]一种肉鸭实时荧光定量PCR内参基因的筛选方法及应用

权利要求书

1.一种肉鸭实时荧光定量PCR内参基因的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用肉鸭转录组测序数据，挑选八个肉鸭内参候选基因，并以挑选的八个肉鸭内参候选基因的核苷酸序列为模板设计了八对实时荧光定量PCR的内参基因引物，八对实时荧光定量PCR的内参基因引物序列及扩增片段序列分别为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.24；

(2)选取肉鸭的十二指肠上皮组织进行实验；

(3)将实时荧光定量PCR得到的数据导入geNorm、NormFinder和BestKeeper软件进行分析，筛选出最优内参基因和内参基因组合。

2.根据权利要求1所述的一种肉鸭实时荧光定量PCR内参基因的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)中，八个所述内参候选基因分别为羟甲基胆素合成酶(HMBS)、肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、TATA框结合蛋白(TBP)、核糖体蛋白L13(RPL13)、酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白(YWHAZ)、18S核糖体RNA(18S rRNA)、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)。

3.根据权利要求1所述的一种肉鸭实时荧光定量PCR内参基因的筛选方法，其特征在于，在步骤(3)中，实时荧光定量PCR的模板为1μg RNA反转得到的cDNA的10倍稀释液，且荧光定量PCR程序为：95℃预变5min；95℃变性15s，60℃退火20s，72℃延伸20s，反应40个循环。

4.一种根据权利要求1所述的肉鸭实时荧光定量PCR内参基因的筛选方法的应用，其特征在于，通过筛选出最稳定的内参基因，从而应用于肉鸭荧光定量PCR基因表达和功能研究。