[发明专利]一种培养人参干细胞的方法

权利要求书

1.一种培养人参干细胞的方法，其特征在于，包括：

(1)将成熟人参清洗消毒，切片，接种到不定根诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到不定根诱导培养基中继代培养扩繁；然后将扩繁获得的人参不定根接种到液体培养基中培养获得人参不定根；所述不定根诱导培养基的组成为1-6mg/L萘乙酸，0.1-0.6mg/L激动素，0.2-1mg/L赤霉素，0.075-1.5g/L柠檬酸，0.03-1g/L抗坏血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-4g/L B5培养基和1-2.4g/L WPM培养基；

(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；

(3)将步骤(2)经渗透剂溶液处理的人参不定根根尖置于干细胞诱导培养基中培养，然后转入扩繁培养基中培养，获得人参干细胞；所述干细胞诱导培养基的组成为0.6-1mg/L激动素，2-4mg/L吲哚乙酸，0.5-1.5mg/L萘乙酸，25-100mg/L抗坏血酸，50-150mg/L柠檬酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基，0.6-1.4g/L WPM培养基；

所述扩繁培养基的组成为2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；

(4)将步骤(3)获得的人参干细胞转入干细胞液体培养基，暗培养获得人参干细胞；

干细胞液体培养基的组成为2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L赤霉素，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；所述步骤(1)中所使用的液体培养基的组成为：10-55g/L蔗糖，0.6-1.6g/L B5培养基，0.3-1.2g/L 1/2MS培养基，1.8-5.4mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，0.6-5.4mg/L萘乙酸，0.8-8mg/L赤霉素，0.6-5.4mg/L吲哚乙酸，0.6-5.4mg/L吲哚丁酸。

2.根据权利要求1所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，步骤(1)所述液体培养基的组成为15-45g/L蔗糖，0.8-1.3g/L B5培养基，0.5-1.0g/L 1/2MS培养基，1.8-4.2mg/L6-苄氨基腺嘌呤，1.8-5.4mg/L萘乙酸，0.8-8mg/L赤霉素，0.6-4.8mg/L吲哚乙酸，0.6-3.6mg/L吲哚丁酸。

3.根据权利要求1所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，步骤(1)所述液体培养基的组成为45g/L蔗糖，1.28g/L B5培养基，0.905g/L 1/2MS培养基，4.2mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，3mg/L萘乙酸，0.8mg/L赤霉素，0.6mg/L吲哚乙酸，0.6mg/L吲哚丁酸。

4.根据权利要求1-3任意一项所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中，取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中低温处理1-10小时。

5.根据权利要求4所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，所述低温温度为1-6℃。

6.根据权利要求5所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，所述低温温度为4℃。

7.根据权利要求4所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，所述人参不定根的根尖部分的长度为0.3mm-0.8mm。

8.根据权利要求1-3任意一项所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，所述渗透剂溶液选自蔗糖溶液、氯化钾溶液、甘露醇溶液中的至少一种。

9.根据权利要求8所述培养人参干细胞的方法，其特征在于，所述渗透剂溶液为1mol/L的蔗糖溶液。