[发明专利]一种构建Serac1基因敲除小鼠模型的方法有效
| 申请号： | 202110417649.3 | 申请日： | 2021-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN113249383B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 吕建新;方合志;杜苗苗;谢安然;聂珂;李晋 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/89;C12N15/55;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 张雪 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 serac1 基因 小鼠 模型 方法 | ||
1.一种sgRNA在构建Serac1基因敲除小鼠模型中的应用，其特征在于，所述sgRNA作用位点位于Serac1基因的Intron2和Intron7的非保守区，所述sgRNA的DNA序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；所述小鼠模型用于MEGDEL综合征的研究中。
2.一种构建Serac1基因敲除小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法基于CRISPR-Cas9基因敲除技术，所述方法包括以下步骤：
步骤1：设计靶向小鼠待敲除Serac1基因的sgRNA；
步骤2：sgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内，获得嵌合体的F0代；对F0代进行PCR鉴定，将阳性F0代小鼠与野生型小鼠交配获得具有稳定基因型的F1代小鼠，筛选Serac1基因敲除的纯合子代，作为Serac1基因敲除小鼠模型；
其中，所述sgRNA作用位点位于Serac1基因的Intron2和Intron7的非保守区，所述sgRNA的DNA序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
3.如权利要求2所述的构建Serac1基因敲除小鼠模型的方法，其特征在于，步骤2中所述的PCR鉴定用引物如下所示：WT-F：5’-agagtcacagtcagcaactctgtgc-3’；
WT-R：5’-gttatgcaaccaggatcaccacgg-3’；
Mut-F：5’-gagtcacagtcagcaactctgtgc-3’；
Mut-R：5’-agttctacgcttcaacccctgcta-3’。
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