[发明专利]几丁质脱乙酰基酶蛋白晶体

权利要求书

1.几丁质脱乙酰基酶蛋白晶体的制备方法，包括：(1)将纯化的蛋白在pH7.4的0.02MTris、0.1M氯化钠缓冲液中浓缩至10mg/mL；(2)在4℃条件下，采用悬滴扩散法形成几丁质脱乙酰基酶的蛋白晶体；所述几丁质脱乙酰基酶晶体形成条件为：将1μL蛋白溶液置于1μL池液的液滴中生长，所述池液的组成为pH 6.8的0.1M丙二酸钠、0.1M Hepes缓冲液、0.7％v/v聚醚胺ED-2001，所述纯化的蛋白为大丽轮枝菌几丁质脱乙酰基酶蛋白，所述几丁质脱乙酰基酶蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述制备方法得到的几丁质脱乙酰基酶蛋白晶体，为三维立体结构，所述晶体具有空间P2₁2₁2₁，晶胞参数为所述晶体的一个不对称单位中有五个分子。

3.根据权利要求2所述的蛋白晶体，所述晶体具有(β/α)₇桶状结构。

4.根据权利要求2所述的蛋白晶体，所述晶体活性中心具有一个锌离子，其与Asp56、His108、His112形成金属三联体结构。

5.根据权利要求2所述的蛋白晶体，所述晶体的底物结合口袋附近具有6个环状结构，构成了短且深的呈电负性的底物结合裂缝，并且在底物结合裂缝分布了四个疏水的芳香族氨基酸，形成了-1、0、+1、+2四个底物结合位点。

6.根据权利要求5所述的蛋白晶体，所述的环状结构的序列为KNFGELKNYV、HTWDHPYLTQLS、RPPYFDYNAKT、HADLDTNDWKFD、GVANNR、VHETTV。

7.根据权利要求5所述的蛋白晶体，所述的芳香族氨基酸为Phe85、Phe150、His168、Trp177。

8.权利要求2-7任一所述蛋白晶体在筛选几丁质脱乙酰基酶抑制剂以及抗真菌剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，所述真菌为大丽轮枝菌。