[发明专利]一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法

权利要求书

1.一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，其特征是，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述酸为三氟乙酸，所述碱为氨水。

4.一种权利要求1～3任一所述的方法在提取滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的应用。

5.一种滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的提取方法，其特征是，步骤如下：

(1)从滇丹参提取获得滇丹参总酚酸提取物；

(2)采用pH区带逆流色谱滇丹参总酚酸提取物进行分离纯化获得含有丹酚酸B和紫草酸的馏分；

(3)采用pH区带逆流色谱对将含有丹酚酸B和紫草酸的馏分进行分离纯化；

其中，步骤(3)中pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。

6.如权利要求5所述的提取方法，其特征是，步骤(3)中，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM；

或，步骤(3)中，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM；

或，步骤(3)中，所述酸为三氟乙酸，所述碱为氨水。

7.如权利要求5所述的提取方法，其特征是，步骤(1)中，从滇丹参提取获得滇丹参总酚酸提取物的过程为：采用乙醇提取法对滇丹参进行提取，提取后的液体采用石油醚进行一次萃取，萃取后的水相调节pH至1.5～2.5，然后添加乙酸乙酯进行二次萃取，对二次萃取的乙酸乙酯相进行浓缩获得滇丹参总酚酸提取物。

8.如权利要求7所述的提取方法，其特征是，将滇丹参加入乙醇水溶液，在65～75℃条件下进行回流提取，将提取液进行浓缩，再加水复溶，然后采用石油醚进行一次萃取；优选地，乙醇水溶液的浓度55～65％体积分数；优选地，滇丹参与乙醇水溶液的料液比为1:7.5～8.5；优选地，回流提取的次数为2～4次，每次回流提取的时间为1.5～2.5h。

9.如权利要求5所述的提取方法，其特征是，pH区带逆流色谱分离提取的过程为：将固定相输送至分离柱，将滇丹参总酚酸提取物的溶液注入分离柱，然后将流动相输送持续输送至分离柱进行分离提取；优选地，固定相输送至分离柱的流速为25～35mL/min；优选地，流动相的流速为1.5～2.5mL/min；优选地，pH区带逆流色谱分离提取中，紫外检测器的检测波长为252～256nm。

10.如权利要求5所述的提取方法，其特征是，步骤(2)中，pH区带逆流色谱的溶剂系统，包括石油醚、乙酸乙酯、乙腈和水，其中，石油醚、乙酸乙酯、乙腈和水的体积比为1.46～1.54:2.46～2.54:1:4.6～5.4；优选地，固定相中三氟乙酸的浓度为9～11mM，流动相中氨水的浓度为29～31mM。