[发明专利]检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒以及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒以及检测方法，涉及免疫分析技术领域。本发明公开的试剂盒包括链霉亲和素标记的磁微粒、生物素标记的突变型瓜氨酸化波形蛋白、可检测标记物标记的标记抗体、以及与所述可检测标记物相适用的底物。该试剂盒具有灵敏度高、特异性好以及线性范围宽等特点，能够快速准确的检测血液样本中的抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体。

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，具体而言，涉及检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒以及检测方法。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种致残性的慢性多关节炎疾病。其特点是滑膜关节的慢性炎症导致身体残疾，发病还受到遗传和环境等因素的影响，发病率有逐年上升的趋势。部分RA患者在发病2年即可出现不可逆转的骨关节破坏而致关节畸形，进而丧失运动能力，研究发现，越早对RA进行干预治疗，就越能有效的控制病情的恶化，减少对身体的损害程度，因此早期的诊断治疗显得至关重要。

RA最常见的标记物有：抗环瓜氨酸肽(CCP)，类风湿因子(RF)，抗核周因子(APF)，RA33，抗Sa以及6-磷酸葡萄糖异构酶等。近年来，抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinatedpeptide，CCP)抗体和类风湿因子在早期RA诊断中，二者高滴度的阳性占比确诊评分的一半权重大大提高了RA早期诊断的可能性。但抗CCP抗体和类风湿因子阴性的RA早期诊断仍然困难，最新研究发现，抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体(抗MCV抗体)与APF、AKA、AFA、CCP抗体以及抗 Sa抗体在化学结构上具有相关性，而且抗MCV抗体经由肽酰精氨酸、亚胺酶等瓜氨酸蛋白结构发生改变，增加了潜在的蛋白决定簇即瓜氨酸簇，与抗角蛋白抗体相比较，抗MCV抗体具有较高的特异性和敏感性。

目前市场上常用于检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的有酶联免疫分析法，胶体金法，磁微粒化学发光法以及免疫荧光层析法等。虽然酶联免疫分析法能准确地检测样品中的抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体浓度，但实际操作中实验耗时较长，操作过程比较复杂。胶体金法和免疫荧光层析法可以快速检测，但只能进行定性或者半定量的检测，准确度偏低，无法为临床判断提供可靠的依据。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒以及检测方法。本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性好以及线性范围宽等特点，能够快速准确的检测血液样本中的抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其包括：链霉亲和素标记的磁微粒、生物素标记的突变型瓜氨酸化波形蛋白、可检测标记物标记的二抗、以及与所述可检测标记物相适用的底物；所述标记抗体可特异性结合所述抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体。

不同于现有技术中将捕获抗原通过偶联剂直接标记到磁珠表面的方法，本发明提供的检测试剂盒利用链霉亲和素与生物素的结合特点，在包被突变型瓜氨酸化波形蛋白即抗原时，用生物素标记的突变型瓜氨酸化波形蛋白连接到链霉亲和素标记的磁微粒上；检测时，吸附在磁微粒上的突变型瓜氨酸化波形蛋白捕捉待测样本中的抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体，可检测标记物标记的二抗与待测样本中的抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体结合，形成抗原-抗体-二抗复合物，在底物存在的条件下实现检测；由于链霉亲和素与生物素的结合比例为1:4，因此通过链霉亲和素与生物素系统可以提高捕获抗原的包被量，从而使其捕获抗体的成功率也会得到提升，最终提升了试剂的检测灵敏度；该试剂盒能快速准确的检测样本中抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的含量，具有灵敏度高、特异性好以及线性范围宽等特点。

可选地，本发明的一些实施方案中，所述磁微粒的粒径为 0.1μm-5μm。