[发明专利]一种外源基因瞬时转化杨树茎段的方法有效
| 申请号： | 202110406728.4 | 申请日： | 2021-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN113388636B | 公开（公告）日： | 2022-12-09 |
| 发明（设计）人： | 卢孟柱;安轶;李晓军 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/65 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 310006 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 瞬时 转化 杨树 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种外源基因瞬时转化银腺杨无性系84k杨树茎段的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.利用菌体悬浮液重悬活化后的农杆菌菌体，得到侵染用菌液；所述菌体悬浮液为含有25 g/L蔗糖，10 mmol/L MES，200 μmol/L AS，pH值为5.6的1/2MS；
S2.将4～6℃保存的茎段在含20～30%蔗糖的1/2MS溶液中浸泡1～3h；
S3.将步骤S2浸泡过的茎段放入有侵染用菌液的容器中，茎段形态学下端浸入侵染用菌液中，形态学上端与抽真空装置的抽真空通路密封连接；即茎段形态学上端通过橡胶管与抽真空装置的抽真空通路的抽气口通过气管密封连接；
S4.抽真空处理，侵染用菌液从茎段形态学下端抽至形态学上端以侵染茎段；
S5.步骤S4转化完毕的茎段进行水培。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，侵染用菌液的OD值为0.3～1.5。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中，0 .08MPa压强下，抽真空处理5到30分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中，抽真空处理1～5次，两次之间间隔1～3天。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S5中，水培9～25天。
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