[发明专利]一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的制备方法及应用，具体步骤如下：新型冠状病毒灭活原液按规定的同一蛋白质含量或抗原含量进行配制后，添加CpG佐剂和铝佐剂，其中，新冠病毒抗原总蛋白含量2‑4μg/ml，CpG含量为5‑40μg/ml，铝含量450μg/ml。本发明有益的效果：该方法制成的双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗可以有效提高当前铝佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的血清效价和中和抗体水平；同时有效降低抗原用量，同时降低生产成本，提高疫苗产率以及未来全球新冠疫苗的使用覆盖率，造福人类。

技术领域

本发明涉及灭活疫苗领域，主要是一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的制备方法及应用。

背景技术

2019年12月末发生严重急性呼吸道综合症疫情，病原学检测结果证实为一种新型冠状病毒，随后细胞分离获得新型冠状病毒株。国际病毒分类委员会将该新型冠状病毒命名为重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndromecoronavirus2，SARS-CoV-2)，WHO将该病毒导致的疾病命名为新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease2019，COVID-19)，属于β冠状病毒家族。这是已知的第七种感染人类的冠状病毒；四种冠状病毒(229E,NL63,OC43，和HKU1)只会引起轻微感冒症状。相反，其他三个，SARS-CoV,MERS-CoV，和SARSCoV-2能引起严重症状甚至死亡，死亡率分别为10％、37％和5％。

SARS-CoV-2表面覆盖着大量的糖基化S蛋白，糖基化S蛋白与宿主细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，介导病毒细胞进入[Letko M,Marzi A,Munster V.Functionalassessment of cell entry and receptorusage for SARS-CoV-2and other lineage Bbetacoronaviruses.Nat Microbiol.2020；5:562–9.]。当S蛋白与受体结合，TM蛋白酶丝氨酸2(TMPRSS2)(一种位于宿主细胞膜上的2型TM丝氨酸蛋白酶)通过激活S蛋白促进病毒进入细胞。一旦病毒进入细胞，病毒RNA就会释放出来，多蛋白从RNA基因组翻译出来，通过蛋白质裂解和复制酶-转录酶复合物的组装来复制和转录病毒RNA基因组。病毒RNA被复制，结构蛋白被合成，在宿主细胞中组装和包装，之后释放病毒颗粒。在自然状态下，新冠病毒S蛋白以无活性前体状态存在，病毒传染过程中，靶细胞蛋白酶通过将其裂解为S1和S2亚基使S蛋白活化[Bertram S,Dijkman R,Habjan M,Heurich A,Gierer S,Glowacka I,etal.TMPRSS2 activates the human coronavirus 229E for cathepsin-independenthost cell entry and is expressed in viral target cells in the respiratoryepithelium.J Virol.2013；87:6150–60.]，这是病毒进入靶细胞后活化膜融合域所必须的[Hoffmann M,Kleine-Weber H,Schroeder S,Kruger N,Herrler T,Erichsen S,etal.SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by aclinically proven protease inhibitor.Cell.2020；181:271–80.e8.]因此，S蛋白是SARS-CoV-2的所有结构蛋白的主要抗原成分。与其他功能蛋白不同，它负责诱导宿主免疫反应，靶向S蛋白的抗体可以诱导针对病毒感染的保护性免疫。S蛋白的特异性效价是疫苗保护作用的重要标志。