[发明专利]iPSC来源外泌体的制备方法、iPSC来源外泌体修复剂和iPSC来源外泌体的应用

说明书

本发明涉及皮肤修复技术领域，具体而言，涉及iPSC来源外泌体的制备方法、iPSC来源外泌体修复剂和iPSC来源外泌体的应用；本发明提供的iPSC来源外泌体的制备方法制备出的诱导多能干细胞来源外泌体应用于皮肤损伤修复效果良好，且效果稳定。含有本发明制备方法制备的诱导多能干细胞来源外泌体的iPSC来源外泌体修复剂在皮肤损伤修复的效果佳，且效果稳定。

技术领域

本发明涉及皮肤修复技术领域，具体而言，涉及iPSC来源外泌体的制备方法、iPSC来源外泌体修复剂和iPSC来源外泌体的应用。

背景技术

干细胞(stemcell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在特定条件下，可以分化为多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官的潜在功能，被称为“万用细胞”。皮肤处于人体的最外层，能够让机体免受病原体的侵害，是人体最大的一个器官。皮肤组织经常发生不同程度的损伤，如机械性损伤、烧伤、烫伤以及糖尿病足引起的溃疡等急性或者慢性的损伤，这不仅影响了个人的身体健康，还给社会带来了巨大的经济负担。相关技术中将干细胞应用于皮肤修复与再生，其主要依靠旁分泌的方式来促进皮肤的损伤后修复。

外泌体作为干细胞的旁分泌因子，其能够促进成纤维细胞的增殖以及迁移、调节炎症反应以及抑制瘢痕形成等方面来促进皮肤损伤后的修复与再生。

但是，相关技术提供的外泌体在皮肤损伤修复中的作用不佳，且效果不稳定。

发明内容

本发明的目的在于提供iPSC来源外泌体的制备方法、iPSC来源外泌体修复剂和iPSC来源外泌体的应用，iPSC来源外泌体的制备方法制备出的诱导多能干细胞来源外泌体的皮肤损伤修复作用良好，且效果稳定，含有诱导多能干细胞来源外泌体的iPSC来源外泌体修复剂的皮肤损伤修复作用良好，且效果稳定。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种iPSC来源外泌体的制备方法，包括：

用DF12+10％FBS培养基培养间充质干细胞；对培养后的间充质干细胞消化、离心；加入仙台病毒重悬细胞于离心后的间充质干细胞，并离心、培养；之后更换完全培养基继续培养；再更换DF12+10％FBS和Stemflex的混合培养基继续培养；之后再每间隔一段时间更换Stemflex培养基继续培养，以培养出诱导多能干细胞；

将培养出的诱导多能干细胞纯化处理，得到纯化后的诱导多能干细胞；

培养纯化后的诱导多能干细胞，并收集培养后得到的第一上清液；将第一上清液离心，得到第二上清液；收集第二上清液离心，得到第三上清液；将第三上清液离心。

在可选的实施方式中，加入仙台病毒重悬细胞于离心后的间充质干细胞后，将其接种于Matrigel。

在可选的实施方式中，将培养出的诱导多能干细胞纯化处理，包括：将培养出的诱导多能干细胞培养一段时间后，取单克隆至Matrigel中继续培养，在单克隆的密度达到70％-90％时，消化传代培养。

在可选的实施方式中，将第一上清液离心时的温度为3℃-5℃；和/或，

将第二上清液离心时的温度为3℃-5℃；和/或，

将第三上清液离心时的温度为3℃-5℃。

第二方面，本发明提供一种iPSC来源外泌体修复剂，iPSC来源外泌体修复剂的原料包括：羟丙基壳聚糖、甘油、聚乙二醇、山梨酸、羟乙基纤维素和前述实施方式任一项的iPSC来源外泌体的制备方法制备出的诱导多能干细胞来源外泌体。

在可选的实施方式中，iPSC来源外泌体修复剂的制备方法包括：将羟丙基壳聚糖、甘油、聚乙二醇、山梨酸和水混合、溶解，再添加羟乙基纤维素，混合；灭菌后添加诱导多能干细胞来源外泌体。