[发明专利]一种检测母猪妊娠及怀胎数量的方法

权利要求书

1.一种检测母猪妊娠及怀胎数量的方法，其特征在于包括下列步骤：

1）在母猪配种后的第7-14天，采集1-10 ml猪血于阴凉处静置1-2小时，分离出血清，或者收集母猪在上次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；

2）将母猪的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE检测试纸插入步骤1）的血清或者尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：

3）显色结果如下：

试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；

试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母猪的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE水平低下，需要隔日进行检测；

试纸质控线C及检测线T都显色，将该显色与促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE比色卡进行下列对比；

31）当促类人绒毛膜性腺激素HCG—LIKE＜10mIU/ml，需要再次重复步骤1）-2），两次检测促类人绒毛膜性腺激素HCG—LIKE持续＜10mIU/ml,表明母猪没有怀孕或胚胎停育；

32）当促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE≧10mIU/ml, 表明母猪可能怀孕，需要每隔一天重复步骤1）-2）进行一次检测，连续检测两次；当后一次检测的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE在上升，且是前一次的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE的1-2倍，表明母猪怀孕，且为活胎，然后再按下列判断胎数；

当HCG---LIKE为 15—30mIU/ml，表明母猪怀单胎；

当HCG---LIKE为 35--60mIU/ml，表明母猪怀双胎；

当HCG---LIKE为 65 --125mIU/ml，表明母猪怀三胎；

当HCG---LIKE为 130 --250mIU/ml，表明母猪怀四胎；

当HCG---LIKE为 255 --500mIU/ml，表明母猪怀五胎，

当HCG---LIKE为 505 --1000mIU/ml，表明母猪怀六胎，

当HCG---LIKE为 1005 --2000mIU/ml，表明母猪怀七胎，

当HCG---LIKE为 2005 --4000mIU/ml，表明母猪怀八胎，

当HCG---LIKE4000mIU/ml，表明母猪怀九胎或九胎以上。

2.根据权利要求1所述的检测母猪妊娠及怀胎数量的方法，其特征在于所述步骤2）猪的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE检测试纸经过下列方法制备：

21）按下列制备各组分：

金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml，加入到100ml质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液中，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；

封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；

样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷和1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；

胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；

HCG--LIKE包被液：将100-200mg猪的促类人绒毛膜性腺激素单克隆α亚级抗体HCG--LIKE mAbCoating、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得HCG--LIKE包被液；

IgG包被液：将羊抗鼠IgG抗体100mg、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得IgG包被液；

22）在底板上划膜

22A）将NC膜贴在PVC板表面的中部，得底板；

22B）用XYZ3010喷金划膜仪，并按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，将IgG包被液均匀地划在步骤22A）底板上的NC膜的上端作为质控线C，将HCG--LIKE包被液均匀地划在相同NC膜的下端作为检测线T，质控线C与检测线T相距6mm±1mm，质控线C距离NC膜上端8mm±1mm，检测线T距离NC膜下端7mm±1mm，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得划膜板；

23）金垫制备

23A）在100ml步骤21）的金溶液中加入1.2ml碳酸钾溶液、1.5-2mg LH单克隆抗体LHmb2，搅拌40min，滴加330ul封闭液，搅拌10min，于4℃、12000r/min的条件下离心40min，弃上清液，取余液5.3 ml，加入40ml 胶体金结合物稀释液混匀；

23B）将步骤23A）混匀的胶体金结合物稀释液均匀铺在1080cm²玻璃纤维素膜RB65上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得金垫；

24）样本垫制备

24A）按30ml/张的量，将步骤21）的样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜SB06上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得样本垫；

25）贴板

25A）将步骤23）的金垫贴于步骤22B）划膜板的NC膜下端，并使1-2mm的金垫后端搭在NC膜上；

25B）将步骤24）的样本垫贴于步骤25A）的金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端；

25C）将吸水垫贴于25B）的PVC板后端，并使1-2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端；

26）将步骤25C）贴板切割成3.0±0.5mm的试纸条，得猪的促类人绒毛膜性腺激素HCG--LIKE检测试纸。