[发明专利]一种具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选和应用

权利要求书

1.一种具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：步骤如下：

(1)选取农产品样品进行冻干、粉碎，在无水乙醇中充分溶解，过滤后浓缩得到农产品提取物，或在80～100℃水中充分溶解，过滤取上清，冻干后得到农产品提取物；

(2)培养肝癌细胞HepG2细胞系，测定步骤(1)所述的农产品提取物对细胞的活性的影响；

(3)再采用基因载体pGL4.37-ARE与内对照报告基因载体pGL4.75共转染HepG2细胞，建立双荧光酶报告基因体系，测定细胞荧光素酶活性值。

2.根据权利要求1所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：筛选出不会引起细胞毒性，并且可以激活Keap1-Nrf2-ARE通路的农产品提取物。

3.根据权利要求1所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：所述农产品为12种日本北海道农产品，所述农产品为土豆、去皮土豆、土豆皮、南瓜、百合根、胡萝卜、洋葱、米糠、红豆、大正金时豆、Kitarosso金时豆和甜菜。

4.根据权利要求1所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：所述步骤1中所述乙醇提取物是选取500～1000g的8种日本北海道农产品进进行冻干、粉碎，在1～2L无水乙醇中充分溶解，并振荡24h，乙醇处理农产品过滤掉滤渣后，使用旋转蒸发仪浓缩提取液制得乙醇提取物；所述8种日本北海道农产品为土豆、去皮土豆、土豆皮、南瓜、百合根、胡萝卜、洋葱和米糠。

5.根据权利要求1所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述热水提取物是选取100～500g的4种日本北海道农产品分别为红豆、大正金时豆，Kitarosso金时豆和甜菜，将农产品进行冻干、粉碎，溶于500mL热水中蒸煮3～4h，过滤后取上清，其中甜菜进行脱糖处理，浓缩冻干后得到热水提取物。

6.根据权利要求1所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的筛选方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述细胞活性采用CCK-8法检测。

7.根据权利要求1所述的双荧光素报告基因检测实验，其特征在于：所述步骤(3)使用lipofectamin 3000转染试剂以1:100的比例同时转染ARE荧光素酶报告质粒pGL4.37和对照质粒pGL4.75，培养24h；培养结束后，各孔分别加入100～500μg/ml多种不同浓度的样品和细胞基础培养基，以10μmol/L的Nrf2激活剂tBHQ作为阳性对照，培养24h；弃上清液，用Dual-Luciferase检测系统检测；通过萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性对比，得到相应荧光素酶活性值。

8.根据权利要求1～7所述的具有抵御氧化应激反应作用的农产品的应用，其特征在于：所述具有抵御氧化应激反应作用的农产品提取物用于Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活剂。