[发明专利]一种定性和定量测定蛋白质的方法及应用

权利要求书

1.一种定性和定量测定蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)根据待测蛋白质种类，筛选分别与待测蛋白质的不同表位特异性结合的第一蛋白和第二蛋白，第一蛋白和第二蛋白间无相互作用；

(2)将第一蛋白的编码基因与报告酶的一段基因片段融合后，表达纯化得第一融合蛋白；将第二蛋白的编码基因与报告酶的另一段基因片段融合后，表达纯化得第二融合蛋白；

(3)将包含待测蛋白质的溶液与第一融合蛋白和第二融合蛋白混合孵育，将孵育产物和所述报告酶的底物混合后，检测光强度，从而检测所述溶液中所述待测蛋白质存在与否和所述待测蛋白质的含量。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，当步骤(1)中所述待测蛋白质为免疫球蛋白G时，第一蛋白的种类包括Protein G或Protein L，第二蛋白的种类包括Protein L或Protein G。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(2)所述报告酶包括荧光素酶NanoLuc@、分裂辣根过氧化物酶、分裂过氧化物酶APEX2或分裂荧光素酶。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述荧光素酶NanoLuc@的一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ ID NO.1所示的序列，另一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ ID NO.2所示的序列。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述分裂辣根过氧化物酶的一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ ID NO.3所示的序列，另一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ ID NO.4所示的序列。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述分裂过氧化物酶APEX2的一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ ID NO.5所示的序列，另一段基因片段的核苷酸序列包含SEQ IDNO.6所示的序列。

7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述分裂荧光素酶包括海肾荧光素酶、萤火虫荧光素酶、发红光叩甲虫荧光素酶或发绿光叩甲虫荧光素酶。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)所述包含待测蛋白质的溶液、第一融合蛋白和第二融合蛋白混合溶液、报告酶的底物的体积比为98:1:1。

9.权利要求1～8任一项所述方法在体外筛选高表达细胞株中的应用。