[发明专利]一种用于评估血管衰老的标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于评估血管衰老的标志物及其应用，所述标志物为内皮细胞膜微粒和/或内皮细胞膜微粒携带的miR‑17‑5p。本发明标志物EMVs及EMVsmiR‑17‑5p与血管衰老(生物年龄)及衰老(时序年龄)存在相关关系，进而能够通过EMVs和/或EMVsmiR‑17‑5p的检测，可以有效评估衰老及血管衰老的情况。

技术领域

本发明涉及血管衰老技术领域，具体涉及一种用于评估血管衰老的标志物及其应用。

背景技术

2017年世界人口统计报告指出目前全球60岁及以上人口为9.62亿人，到2050年这一年龄层的人口数量将达到21亿人。随着年龄增大，动脉僵硬度增加，内膜增厚以及内皮功能失调，易发生冠心病、脑卒中等疾病。血管衰老是引起人体各器官系统衰老的重要病理、生理基础，是老年人罹患多种衰老相关疾病的共同发病机制，血管衰老是脑衰老发生的早期特征之一，人的实际年龄无法体现真实的血管老化情况。例如，青年人可能由于长期熬夜或抽烟、酗酒等不良嗜好，其血管提早出现老化，老年人也可能因为良好的生活习惯拥有“年轻化”的血管，而目前尚缺乏真实反映血管老化程度的标志物以及评估方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于评估血管衰老的标志物及其应用，该标志物与血管衰老存在相关系，能够用于血管衰老的评价，解决了目前尚缺乏真实反映血管老化程度的标志物的问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供一种用于评估血管衰老的标志物，所述标志物为内皮细胞膜微粒和/或内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p。

优选地，所述标志物为内皮细胞膜微粒和内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p。

本发明第二方面提供一种上述标志物在制备评估血管衰老的产品中的应用。

本发明第三方面提供一种用于评估血管衰老的试剂盒，所述试剂盒包括检测内细胞膜微粒和/或内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p的物质。

本发明第四方面提供一种用于血管衰老的评估方法，所述评估方法包括内皮细胞膜微粒和/或内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p的检测方法；

再根据内皮细胞膜微粒和/或内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p的检测结果评估血管衰老程度。

优选地，所述内皮细胞膜微粒的检测方法包括：

(a)去除静脉血样品中血细胞，收集血浆，将血浆进行离心、重悬，得到总细胞膜微粒；

(b)采用磁力架磁珠分选方法在总细胞膜微粒中筛选出CD105+CD144+阳性标记的细胞膜微粒，即得内皮细胞膜微粒。

优选地，所述步骤(a)中，离心包括先在300g下离心15min，再在2000g下离心20min，最后在20000g下离心70min。

优选地，所述内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p的检测方法包括：

(a)提取内皮细胞膜微粒中的总RNAs；

(b)将总RNAs逆转录为cDNA；

(c)采用染料法PCR试剂盒检测miR-17-5p水平。

优选地，所述染料法PCR试剂盒检测miR-17-5p水平包括：

采用如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的扩增引物对内皮细胞膜微粒携带的miR-17-5p进行扩增。

优选地，所述步骤(b)中，逆转录反应条件为：

25℃30min,42℃30min，85℃5min。