[发明专利]一种新发现miRNA–mRNA调控轴介导肺腺癌NCI-H1299细胞焦亡的方法

说明书

本发明涉及一种新发现miRNA–mRNA调控轴，即miR‑1228‑5p–PRKCDBP调控轴，介导肺腺癌NCI‑H1299细胞焦亡的作用机理及实施方法，属于生物技术应用领域。本发明首次提出miR‑1228‑5p和PRKCDBP在肺腺癌NCI‑H1299细胞焦亡领域的应用，并提供构建miR‑1228‑5p敲减载体和PRKCDBP过表达载体，明确它们介导肺腺癌NCI‑H1299细胞焦亡作用机理。同时，体外证实miR‑1228‑5p和PRKCDBP基因间相互作用关系，提供了miR‑1228‑5p–PRKCDBP调控轴存在依据。本发明提供了敲减miR‑1228‑5p、过表达PRKCDBP及miR‑1228‑5p–PRKCDBP调控轴介导肺腺癌NCI‑H1299细胞焦亡的新机制，因此，根据miR‑1228‑5p–PRKCDBP调控轴开发制备抗肺腺癌药物及基因编辑疗法具有明显的临床运用价值。

技术领域

本发明涉及一种新发现miRNA–mRNA调控轴介导肺腺癌NCI-H1299细胞焦亡的方法，属于生物技术应用领域。

背景技术

肺癌在当前世界范围内仍是死亡率最高的肿瘤。随着科技的发展，虽然针对肺癌的治疗方法在不断进步，但临床效果仍然有限。现代医学认为，基因的调节对于疾病发生发展及转归具有决定性作用，针对基因的治疗思路在未来有望突破传统治疗的桎梏，成为根治疾病的重要手段。

NCI-H1299细胞是一种典型的p53基因缺失肺腺癌细胞。p53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变。研究NCI-H1299细胞的抗肿瘤应用对治疗肺癌具有重要意义。

miR-1228-5p基因是一种长度21bp的微小RNA，其来源于miR-1228前体RNA的5’臂端。miR-1228在肺癌相关生物学进程中有所报道。如在Daishi Chen等人的研究中，miR-1228作为海绵体基因介导circRNA hsa_circ_100395调控TCF21抑制肺癌进展，但其研究对象为miR-1228前体的3’臂，全名为miR-1228-3p，且研究范围局限在了A549和H460细胞上。与此类似的Wei-Xiao Xue等人也提出miR-1228-3p在非小细胞肺癌诊断和进展中具有意义，均有别于miR-1228-5p。

PRKCDBP被鉴定为蛋白激酶C的结合蛋白，其表达水平在多种细胞系中下调，具有潜在的抑癌作用。在现有的肺癌相关研究中，Jiali Fu等人认为，低水平的PRKCDBP通过DNMT1和TNF-α促进肺腺癌对顺铂耐药，但PRKCDBP高表达对肺腺癌的杀伤应用并未提及。

现有研究都未见直接报道miR-1228-5p和PRKCDBP通过细胞焦亡机制抑制肺腺癌NCI-H1299的应用，miR-1228-5p-PRKCDBP调控轴在抗肺癌方面的应用更是无从提及。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新发现miRNA–mRNA调控轴介导肺腺癌NCI-H1299细胞焦亡的方法，对miR-1228-5p-PRKCDBP调控轴肺腺癌NCI-H1299细胞作用机制深入研究，解决miR-1228-5p-PRKCDBP调控轴在肺腺癌NCI-H1299细胞作用机制中的理论及应用缺陷，提供临床运用miR-1228-5p-PRKCDBP调控轴治疗肺腺癌的理论依据。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种新发现miRNA–mRNA调控轴介导肺腺癌NCI-H1299细胞焦亡的方法，将miR-1228-5p-PRKCDBP调控轴中miR-1228-5p敲减或PRKCDBP过表达后，促进肺腺癌NCI-H1299细胞焦亡。

miR-1228-5p的具体基因序列如SEQ ID NO：1所示。

miR-1228-5p敲减所用抑制剂miR-1228-5p inhibitors的基因序列，如SEQ IDNO：2所示，对照组NC inhibitors的基因序列如SEQ ID NO：3所示。