[发明专利]一种用于分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢行为的方法

说明书

本发明提供了一种用于分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢行为的方法，涉及环境毒理学技术领域。所述方法包括以下步骤：(a)建立鸡肝微粒体孵育体系；(b)将不同浓度的PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体孵育液中孵育代谢；(c)以气相色谱仪和电子捕获检测器测定孵育液中PCB95及其代谢物的含量；(d)根据定量结果，分析评价PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中的特征代谢行为和毒性差异。该方法可以同时分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢情况，操作简单、分析速度快。

技术领域

本发明涉及环境毒理学技术领域，尤其是涉及一种用于分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢行为的方法。

背景技术

多氯联苯(Polychlorinated biphenyls，简称PCBs)是由联苯多次氯化而成的持久性有机污染物，已在生物体和自然环境中检出，且能对生物体产生一系列不良影响，包括导致癌症以及对神经、生殖、内分泌等系统造成不良影响。因此在20世纪70年代末PCBs就已经被禁止工业生产，但是其仍以工业副产品的方式存在于环境中。不仅如此，由于PCBs具有生物蓄积性，能在生物体中代谢成羟基代谢物、甲氧基代谢物和甲磺基代谢物，其中羟基代谢物为主要产物。

我国是全球最大的鸡蛋生产和消费国，鸡蛋中PCBs残留检出已有不少报道，这是人群摄入PCBs的一个不容小觑的来源，说明PCBs在蛋鸡中具有蓄积、代谢和迁移性，且研究发现鸡对多氯联苯较敏感。但目前研究主要停留在通过鼠、狗、兔等微粒体对PCB95的分布和代谢物的鉴定，同时对PCB95及其代谢物在鸡中的代谢动态鲜有研究，而在鸡肝微粒体中的研究甚至没有相关报道。

鉴于此，该发明拟提供一种高效可行的方法解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢行为的方法。该方法可以同时分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢情况，操作简单、分析速度快。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种用于分析PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中代谢行为的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)建立鸡肝微粒体孵育体系；

(b)将不同浓度的PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体孵育液中孵育代谢；

(c)以气相色谱仪和电子捕获检测器测定孵育液中PCB95及其代谢物的含量；

(d)根据定量结果，分析评价PCB95及其代谢物在鸡肝微粒体中的特征代谢行为和毒性差异。

在一个实施方案中，所述代谢物包括4-OH-PCB95和4-MeO-PCB95。

在一个实施方案中，步骤(a)中，所述孵育体系中，鸡肝微粒体蛋白浓度范围为0.1～0.5mg/mL；优选0.1mg/mL。

在一个实施方案中，步骤(a)的孵育体系中含有孵育缓冲液；优选地，将所述鸡肝微粒体与所述孵育缓冲液混匀后，置于水浴中震荡预孵育5-8min。

在一个具体的实施方案中，步骤(a)建立鸡肝微粒体孵育体系包括在冰浴中依次加入鸡肝微粒体、pH 7.4Tris-HCl孵育缓冲溶液(含50mmol Tris-HCl、1mmol NADPH-Na4、5mmol MgCl₂)于培养瓶中，孵育液总体积为200μL并混匀，置37℃水浴震荡预孵育5min。

在一个实施方案中，步骤(b)中，PCB95的孵育浓度范围为0～144.26μg/mL，4-OH-PCB95的孵育浓度范围为0～11.132μg/mL，4-MeO-PCB95的孵育浓度范围为0～55.36μg/mL。