[发明专利]一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法

说明书

本发明属于丛枝菌根真菌孢子培养技术领域，公开了一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，丛枝菌根真菌孢子的筛选，称取含丛枝菌根真菌的沙子菌剂倒入无菌水，搅拌；过目筛收集筛面上的物质置于离心管中，进行离心；沉淀中再加入蔗糖溶液，充分悬浮后，进行离心；将上清液过目筛，将筛面上的孢子转入到无菌烧杯中；丛枝菌根真菌孢子的消毒，将步骤一中无菌烧杯中收集的孢子倒入无菌的自制消毒装置中，用无菌水冲洗数遍，再加入消毒液，盖紧离心管盖，振荡，消毒，用无菌水冲洗；用链霉素和的庆大霉素混合液的抗生素溶液浸泡孢子；以无菌水冲洗数遍；再进行孢子挑选、接种和培养。本发明采用一定浓度的硒元素促进孢子萌发和菌丝生长。

技术领域

本发明属于丛枝菌根真菌孢子培养技术领域，尤其涉及一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法。

背景技术

目前，丛枝菌根真菌(Arbuscular mycorrhiza fungi，AMF)是一类能与绝大部分植物的根系形成互惠共生体的微生物。它们是分布最广，与农林业生产关系最为密切的一类菌根。AMF具有一系列有益的生理效应，研究表明，AMF能在植物根系形成庞大的菌丝网络系统，增强寄主植物对土壤中氮、磷、钾等元素的吸收能力，显著改善植物营养状况，促进植物生长，提高植物的抗逆性。因此，AMF在农林业生产及园林绿化领域具有广泛的应用前景。由于AMF的促生作用，其作用机理的基础研究和菌剂开发的应用研究显得非常重要。一方面，对于作用机理的基础研究，需要进行丛枝菌根真菌的离体纯培养，而丛枝菌根真菌属于内生寄生真菌，必须侵染进入宿主才能完成生活史，导致目前丛枝菌根真菌的离体纯培养仍然存在很大问题，制约了基础研究的进展。另一方面，对于菌剂开发的应用研究，主要采用将丛枝菌根孢子接种到易感宿主植物栽培基质中，孢子在土壤中遇到宿主植物根系并形成共生之前，丛枝菌根真菌经历一个前共生阶段，包含孢子萌发、菌丝生长和形成分枝。之后菌丝侵入植物根系，形成附着胞，再入侵到根内并在细胞间延伸，形成丛枝状结构，然后外生菌丝生长，最后形成孢子，将宿主植物根系和栽培基质收集并干燥后得到的混合物就是菌剂。在这个过程中，孢子的前共生阶段即孢子的萌发和菌丝生长是非常关键的阶段。孢子的萌发和菌丝生长受很多因素影响，包括水分、温度、湿度、矿质元素等，使得其萌发、菌丝生长和对宿主的侵染率不高和不稳定，难以得到稳定的、高密度的菌剂，制约了大规模应用。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)丛枝菌根真菌的离体纯培养仍是技术难题，限制了AMF的基础研究。

(2)丛枝菌根真菌在自然状态下的萌发和菌丝生长受到多种因素的影响，对菌剂高密度扩繁的开发利用产生影响。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过本发明方案的实施，在培养基中添加适当浓度的硒，可促进离体纯培养条件下丛枝菌根真菌的萌发和菌丝生长，有利于AMF作用机理的基础理论研究，进一步可应用于土壤基质中，开发高密度的丛枝菌根真菌菌剂，大规模用于植物的促生。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法。

本发明是这样实现的，一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，包括：

步骤一，丛枝菌根真菌孢子的筛选，称取含丛枝菌根真菌的沙子菌剂倒入无菌水，搅拌；先过目筛，滤液过目筛，收集筛面上的物质置于离心管中，进行离心；沉淀中再加入蔗糖溶液，充分悬浮后，进行离心；将上清液过目筛，将筛面上的孢子转入到无菌烧杯中；

步骤二，丛枝菌根真菌孢子的消毒，将步骤一中无菌烧杯中收集的孢子倒入无菌的自制消毒装置中，用无菌水冲洗数遍，再加入消毒液，盖紧离心管盖，振荡，消毒，用无菌水冲洗；再用链霉素和的庆大霉素混合液的抗生素溶液浸泡孢子；以无菌水冲洗数遍，消毒完成后将滤布上的孢子用少量无菌水冲洗到无菌培养皿中备用；