[发明专利]一种胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白及其单克隆抗体和制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种CHO‑K1细胞株，所述的CHO‑K1细胞株含有能高效分泌表达PGⅡ重组蛋白的基因。本发明还公开了一种制备所述的CHO‑K1细胞株的方法，所述方法包括以下步骤：1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中，以得到含有PGⅡ重组蛋白编码基因的重组质粒；2)再将所述重组质粒转染至CHO‑K1细胞中，以得到CHO‑K1细胞株；3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述CHO‑K1细胞株，以得到高效分泌表达PGⅡ重组蛋白的细胞株。本发明还公开了抗PGⅡ单克隆抗体，所述的单克隆抗体1结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa78‑aa90；所述的单克隆抗体2结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa280‑aa291。本发明的蛋白表达量高，质量好，成本低；单克隆抗体能配对用于PGⅡ蛋白的检测，特异性好、灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种一种胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白及其单克隆抗体和制备方法。

背景技术

胃蛋白酶原(pepsinogen，PG)是一种具有消化功能的内切蛋白酶，是由375个氨基酸组成的单链多肽，属于天冬氨酸蛋白家族。人胃蛋白酶原可根据在琼脂凝胶电泳下的迁移率由快至慢分为pgl-pg7七种同工酶原，其中pgl-pg5有共同的免疫原性，也叫PG I；pg6到pg7迁移率较慢，也叫PG II。在组织体内，PG I和PG II的细胞来源和组织分布各不相同。有研究表明PG I水平降低是胃病发生与发展的可靠标志。国外也有人把低水平血清PG看作是胃病发生与发展的标志，其通过流行病学研究发现，血清PG在胃粘膜萎缩范围较广，尤其是累及胃体时才有较明显的下降。因此，检测PG I和PG II在临床上面具有重要的指导意义。

目前，市面上有多种用于PG II检测的诊断试剂，方法学主要集中于免疫学诊断，具体为胶体金、化学发光、生化比浊法。使用这些方法的前提是有PG II蛋白以及适配的抗体。目前，PG II蛋白的来源主要有2种方式，一是从人血清中纯化PG II蛋白，二是基因重组的方法体外表达PG II蛋白。因第一种方法费事费力，故成本相对较高，而第二种方法又要考虑合适的表达体系，以使表达的蛋白更接近于人体内的PG II蛋白。针对PG II蛋白的检测，使用单克隆抗体的特异性和灵敏度都较多抗更好，因此，筛选合适的单克隆抗体对PGII蛋白的诊断检测起着重要的作用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提出了一种PG II重组蛋以及相关的单克隆抗体和制备方法及应用。

因此，本发明一方面提供了一种CHO-K1细胞株，所述的CHO-K1细胞株含有能高效分泌表达胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的基因。

优选地，本发明所述的的胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的基因是经过密码子优化后的核苷酸序列。

优选地，本发明所述的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本发明还提供了一种所述的CHO-K1细胞株的方法，所述方法包括以下步骤：1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中，以得到含有胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白编码基因的重组质粒；2)再将所述重组质粒转染至CHO-K1细胞中，以得到CHO-K1细胞株；3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述CHO-K1细胞株，以得到高效分泌表达胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的细胞株。

优选地，本发明所述的真核表达载体为pEE12.4。

再一方面，本发明还提供了一种抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体，所述的抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体是使用权利要求1所述的CHO-K1细胞株表达的胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白制备的，所述的单克隆抗体1结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa78-aa90；所述的aa78-aa90的氨基酸序列为SerIleGlyThrProProGlnAsnPheLeuValLeuPhe；所述的单克隆抗体2结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa280-aa291；所述的aa280-aa291的氨基酸序列为SerLeuLeuThrValProGlnGlnTyrMetSerAla。