[发明专利]腺胃坏死病毒实时荧光定量PCR检测试剂及应用在审
| 申请号： | 202110388864.5 | 申请日： | 2021-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN112877478A | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 戚南山;蔡海明;李秀;孙铭飞;廖申权;吕敏娜;吴彩艳;李娟;林栩慧;胡俊菁;肖文婉;张小慧;张健騑 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 董洪荣 |
| 地址： | 510665 广东省广州市天河区五*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 坏死 病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 试剂 应用 | ||
1.用于检测腺胃坏死病毒的引物对，其序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.15所示。
2.一种腺胃坏死病毒检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的腺胃坏死病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括dNTPs、Mg2+、双链DNA结合荧光染料、DNA聚合酶、腺胃坏死病毒标准品以及水。
4.根据权利要求3所述的腺胃坏死病毒检测试剂盒，其特征在于，所述双链DNA结合荧光染料选自溴化乙锭、SYBR Green、PicoGreen中的任一种。
5.根据权利要求3所述的腺胃坏死病毒检测试剂盒，其特征在于，所述腺胃坏死病毒标准品为含腺胃坏死病毒的质粒。
6.一种腺胃坏死病毒的非诊断目的检测方法，包括以下步骤：
a、以已知浓度的含腺胃坏死病毒的质粒为模板、以双链DNA结合荧光染料以及SEQ IDNO.6和SEQ ID NO.15为引物对进行实时荧光定量PCR反应，建立标准曲线；
b、在与步骤a相同的条件下对待测样本进行实时荧光定量PCR，并根据所述标准曲线确定所述待测样本中的腺胃坏死病毒的拷贝数。
7.根据权利要求6所述的腺胃坏死病毒的非诊断目的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR反应的退火温度为56℃～60℃，循环数为38～42。
8.根据权利要求7所述的腺胃坏死病毒的非诊断目的检测方法，其特征在于，还包括在38～42个循环之后，按照下述反应条件进行反应以得到熔解曲线的步骤：先升至96℃～95℃，后降到67℃～63℃，再升至96℃～95℃，每0.5℃读板一次。
9.根据权利要求6所述的腺胃坏死病毒的非诊断目的检测方法，其特征在于，10μL的实时荧光定量PCR的反应体系中，加入SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.15所示引物各0.5μL，质粒模板或待测样本0.5μL。
10.根据权利要求9所述的腺胃坏死病毒的非诊断目的检测方法，其特征在于，如SEQID NO.6所示引物和如SEQ ID NO.15所示引物的工作浓度分别为100nM。
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