[发明专利]用于抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1表达的靶向药物及应用

说明书

本发明公开了用于抑制黑素瘤细胞膜表面PD‑L1表达的靶向药物及应用，涉及生物技术与医学领域，所述靶向药物用于抑制A20蛋白表达或降低A20蛋白的活性，抑制黑素瘤细胞膜表面PD‑L1的表达，进一步促进细胞毒性T淋巴细胞活化，该药物通过抑制黑素瘤细胞膜表面PD‑L1表达，进一步促进CD8⁺T细胞瘤团浸润和活化并抑制黑素瘤生长和发展，为抑制PD‑1单抗治疗抵抗、克服耐药性提供有效手段。

技术领域

本发明涉及生物技术与医学领域，尤其涉及用于抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1表达的靶向药物及应用。

背景技术

黑素瘤是黑素细胞来源的恶性肿瘤，其发病率和致死率在近数十年来逐渐增加。在浅肤色人群中，黑色素瘤发病率按照每年3-7％的比例递增，且超过1/5的黑色素瘤患者发生肿瘤转移，与致死相关。和其他实体肿瘤相比，黑色素瘤侵袭转移比例更高，致死的平均年龄更低。因此，黑色素瘤的发病及进展的分子机制研究也受到极大关注。

恶性黑素瘤是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤，早期黑素瘤患者预后较好，治疗以手术为主；晚期黑素瘤的治疗效果差，死亡率高。其自然病程中出现的与淋巴细胞浸润相关的肿瘤自发回缩或消退现象，以及黑素瘤对各种免疫治疗较好的临床反应均提示了黑素瘤是一种免疫原性肿瘤。且T细胞数量和活性受损是肿瘤免疫逃避的一个重要机制，免疫抑制性分子程序性细胞死亡受体1(PD-1)通路研究在免疫靶向治疗中具有里程碑式的意义，代表药物有nivolumab、pembrolizumab等，2012年美国临床肿瘤学会年会报告的数据显示抗PD-1的免疫治疗对以黑素瘤为主的多种肿瘤有效。

PD-1是第二代免疫检查点临床靶点，它是CD28超家族的一员，是含288个氨基酸的细胞膜蛋白，表达于活化T细胞的抑制性受体，高表达于黑素瘤抗原特异性T细胞，其配体PD-L1表达于抗原呈递细胞及肿瘤细胞。PD-1与配体结合后抑制具有抗肿瘤能力的细胞毒性T细胞的活性，并下调T细胞应答，从而诱导和维持外周免疫耐受，保护组织避免免疫攻击，同时也能减弱感染性免疫和肿瘤免疫。抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体通过竞争性地与PD-1及PD-L1结合，从而解除T细胞的免疫抑制状态，进而有效的治疗黑素瘤。虽然PD-1单抗疗法在治疗黑素瘤上有一定的疗效，但是仍存在治疗抵抗，严重限制了该疗法在临床上的使用和患者预后。

大多数细胞中A20都是低表达的，当NF-TNFκB被TNFα等炎性因子活化后，会与A20启动子区的NF-TNFκB受体结合，A20会迅速被活化并且负调控NF-TNFκB、MAPK等通路，从而改变IFNγ、TNFα、IL-12、IL10、IL-15和IL-21在内的多种细胞因子的表达水平。

因此目前急需一种抑制黑素瘤PD-1单抗免疫疗法治疗抵抗的药物，为提高PD-1单抗疗法临床疗效具有重要意义，也为治疗黑素瘤疾病提供新的方向。

发明内容

针对以上问题，本发明提供了用于抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1表达的靶向药物及应用，该药物通过抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1表达，进一步促进CD8⁺T细胞瘤团浸润和活化并抑制黑素瘤生长和发展，为抑制PD-1单抗治疗抵抗、克服耐药性提供有效手段。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

用于抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1表达的靶向药物，所述靶向药物用于抑制A20蛋白表达或降低A20蛋白的活性。

进一步，所述靶向药物抑制黑素瘤细胞膜表面PD-L1的表达，促进细胞毒性T淋巴细胞(CD8⁺T)活化。

进一步，所述靶向药物为慢病毒携带特异性靶向A20蛋白基因TNFAIP3的shRNA表达产物。

进一步，所述慢病毒的基因组插入靶向A20蛋白基因TNFAIP3的干扰RNA(shRNA)序列，通过慢病毒的表达系统可以表达出该shRNA，进一步抑制TNFAIP3的表达。