[发明专利]一种兔巴氏杆菌病二价灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种兔巴氏杆菌病二价灭活疫苗及其制备方法。所述灭活疫苗含有兔A型多杀性巴氏杆菌为多杀性巴氏杆菌PmA04（CCTCC NO：M 2021202），及兔D型多杀性巴氏杆菌为多杀性巴氏杆菌PmD01（CCTCCNO：M 2021201）。所述的二价灭活疫苗是用多杀性巴氏杆菌PmA04和多杀性巴氏杆菌PmD01作为抗原灭活后再加入体积终浓度为10%的法国赛比克公司的商品化MONTANIDE^TM GEL 02 PR佐剂制备得到。本发明的二价灭活疫苗能同时预防A型多杀性巴氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌对兔的感染，具有一针两防的效果，且灭活疫苗安全可靠，不存在散毒的隐患。

技术领域

本发明涉及一种兔巴氏杆菌病二价灭活疫苗及其制备方法，属于兔用疫苗制备技术领域。

背景技术

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌感染引起兔的一种传染病。该病一年四季均可发生，且所有日龄的兔均可发病，是兔的常发病和多发病。临床上，兔巴氏杆菌病以呼吸道症状多见，也可见中耳炎、结膜炎和子宫积脓等症状。多杀性巴氏杆菌在我国兔群中广泛流行，其感染常常引起严重的经济损失，是阻碍兔产业发展的重要病原之一。多杀性巴氏杆菌血清型众多，根据多杀性巴氏杆菌的荚膜抗原可将其分为5种血清型，即A、B、D、E和F型，各血清型的菌株之间无交叉保护。近年来的研究调查表明，A型多杀性巴氏杆菌和D型的多杀性巴氏杆菌已经成为我国兔群中的主要流行菌株，且常见这两种血清型菌株的混合感染。然而，目前我国仅有针对兔A型多杀性巴氏杆菌的商品化灭活疫苗。当前我国兔群中D型多杀性巴氏杆菌也很常见，现有疫苗不能对其起到预防作用。因此，亟需一种新的能同时预防我国兔群中A型多杀性巴氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌的二价灭活疫苗以有效地预防和控制兔巴氏杆菌病。

发明内容

本发明的目的在于提供一种包含了A型多杀性巴氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌的二价灭活疫苗及其制备方法。所述菌株的血清型能代表我国兔群中主要流行菌株的血清型，通过该方法制备得到的灭活疫苗可以更好、更全面的保护兔抵抗多杀性巴氏杆菌的感染。

本发明所提供的二价灭活疫苗，包含抗原和佐剂，其中抗原为灭活的兔A型多杀性巴氏杆菌和兔D型多杀性巴氏杆菌；佐剂为法国赛比克公司的商品化MONTANIDE^TM GEL 02PR佐剂。

所述的兔A型多杀性巴氏杆菌是从多例呼吸道病死兔肺脏样品中分离和筛选得到的对兔具有强致病性的多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida ）PmA04，该菌已于2021年3月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021202。地址为武汉大学。

所述的兔D型多杀性巴氏杆菌是从多例呼吸道病死兔肺脏样品中分离和筛选得到的对兔具有强致病性的多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida ）PmD01，该菌已于2021年3月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2021201。地址为武汉大学。

所述的二价灭活疫苗中，兔A型多杀性巴氏杆菌抗原含量和兔D型多杀性巴氏杆菌抗原含量均为1.8×10¹⁰-9.0×10¹⁰ CFU/mL。

本发明提供的二价灭活疫苗，其制备方法如下：

1）将兔A型多杀性巴氏杆菌PmA04和兔D型多杀性巴氏杆菌PmD01分别接种到脑心浸液培养基中扩大培养，得到兔A型多杀性巴氏杆菌菌液和兔D型多杀性巴氏杆菌菌液；

2）分别向步骤1）培养好的兔A型多杀性巴氏杆菌菌液和兔D型多杀性巴氏杆菌菌液中加入终浓度为0.2%（V/V）的甲醛，37℃ 100rpm灭活24小时，得到灭活菌液；