[发明专利]用于MGI平台高通量测序文库快速定量的方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于MGI平台高通量测序文库快速定量方法及试剂盒。该方法包括利用含有引物和探针的组合物对待测高通量测序文库进行荧光定量PCR检测；含有引物和探针的组合物包括检测MGI文库的第一引物和第一探针，和检测拟南芥PHYA基因的第二引物和第二探针，第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列，第一探针包括SEQ IDNO:3所示序列。试剂盒包括第一引物和第一探针，还包括第二引物和第二探针，第二引物包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示序列，第二探针包括SEQ ID NO:6所示序列。所提供的方法或试剂盒可用于对高通量测序文库快速定量。

技术领域

本发明属于基因测序领域，具体涉及一种用于MGI平台高通量测序文库快速定量的方法及试剂盒。

背景技术

高通量测序(NGS)文库制备的目的是，在片段化后的待测核酸片段上连接特异性的接头序列，让它们能够在高通量测序平台上进行测序。NGS文库的质量对于高通量测序产出的数据质量至关重要。因此，NGS文库在上机测序之前，需要对其浓度进行精准测定，以便上机测序时能够调整得到合适的上机测序浓度，最终获得最优的测序数据结果。

对NGS文库进行荧光定量PCR(QPCR)法检测，可以实现样品的定量检测。其是使用特异性引物对文库中两端接头连接完整的样品，进行检测，通过该方法可以排除单端或双端都不连接接头的不可测序文库的干扰，是目前行业内进行文库定量的首选方法。

然而，常规的QPCR法均采用荧光染料法，不仅特异性低，其非特异性扩增也会增加定量不准的风险。因此，针对高通量测序文库的荧光定量检测还需要进一步改进。

发明内容

本发明在一定程度上解决上述技术问题。针对NGS文库的QPCR法定量检测，是以Taqman探针法为主。要实现高通量测序文库的绝对定量，需要将待测NGS文库的检测结果，与标准品制备的标准曲线进行比较，通过标准曲线进行相对定量，然后再根据待测NGS文库的片段与标准品片段的大小差异进行定量结果的校正。理论上，NGS文库定量方法Taqman探针QPCR定量检测，能够比较准确的定量NGS文库，为上机测序提供准确的浓度信息。为此本发明提供了一种用于MGI平台高通量测序文库快速定量的方法及试剂盒。

本发明的第一方面提供了一种用于MGI平台高通量测序文库定量检测的方法，其包括：

提供待测高通量测序文库；

利用含有引物和探针的组合物对所述待测高通量测序文库进行荧光定量PCR检测，以便获得摩尔浓度定量结果；

所述含有引物和探针的组合物包括：检测MGI文库的第一引物和第一探针，和检测拟南芥PHYA基因的第二引物和第二探针，

所述第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列，所述第一探针包括SEQID NO:3所示序列。

本发明所提供的方法可以用于高通量测序文库的快速定量。本发明基于多重荧光定量PCR技术，采用MGI文库特异性引物和荧光标记探针，引入外源拟南芥基因PHYA作为内标，能够在保证扩增体系成功的条件评估靶标扩增质量，进一步保证结果的准确性和有效性。相对于现有的QUBIT和QSEQ100核酸文库的浓度定量检测，操作繁琐，时间人力成本高，定量出的DNA片段大小本身不一致难以绝对统一等诸多弊端而言；本发明所提供的方法能够更准确的获得高通量测序文库的实际摩尔浓度，且无需进行基于高通量测序文库DNA片段大小的校正，这对高通量测序具有重要意义，可以提高测序质量，从而获得最优的测序数据结果。

本发明的第二方面提供了一种用于高通量测序文库定量检测的试剂盒，包括：

检测MGI文库的第一引物和第一探针，所述第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示序列，所述第一探针包括SEQ ID NO:3所示序列；