[发明专利]一种用于筛选抗稻瘟病Pik位点新等位基因的引物和方法在审
| 申请号： | 202110382681.2 | 申请日： | 2021-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN113122649A | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 周莹;万涛;邱文秀;王琼;刘嵩 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 | 代理人： | 胡清堂 |
| 地址： | 430060 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 筛选 稻瘟病 pik 位点新 等位基因 引物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于筛选抗稻瘟病pik位点新等位基因的引物，其特征在于，所述引物为：
PikQ1P1-F：ACCCATTGCGAGAGGACCGAGAAA；
PikQ1P1-R：GAATAGGTCTGTGTTGCGAAATCT；
或
PikQ2P2-F：ATTGGACTATGGTGGAGACTGGGC；
PikQ2P2-R：CTAGTTCATGGCTACACCTCTCCC。
2.一种筛选抗稻瘟病pik位点新等位基因的方法，其特征在于，使用权利要求1所述的引物，具体包括以下步骤：
S1、从目标水稻的叶片中提取其基因组DNA；
S2、以步骤S1的基因组DNA为模板，使用PikQ1P1-F、PikQ1P1-R或PikQ2P2-F、PikQ2P2-R对其进行PCR扩增；
S3、对扩增产物进行测序、组装后，与Pik-m基因的参考序列进行比对，根据插入或缺失数量进行新等位基因的筛选。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增条件如下：
反应体系：50μL，100ng模板DNA、0.2μL引物、5μL缓冲液、8μL dNTP混合物和2.5U Taq酶；
反应程序：94℃预变性5min；94℃变性1min 68℃退火和延伸5min，35个循环；72℃延伸5min。
4.含有权利要求1所述引物的检测试剂盒。
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