[发明专利]一种鉴别粘盖乳牛肝菌的核酸分子引物、方法及试剂盒有效
| 申请号： | 202110382675.7 | 申请日： | 2021-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN113502344B | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 陈佳佳;刘国华;宋杰;于健;陈义彬;杨广荣 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院;中国林业科学研究院热带林业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 广州骏思知识产权代理有限公司 44425 | 代理人： | 李国钊 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 乳牛 核酸 分子 引物 方法 试剂盒 | ||
1.一种鉴别粘盖乳牛肝菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：提取粘盖牛肝菌待测样品DNA；
S2：以样品DNA为PCR扩增的模板，用核酸分子引物作为扩增引物进行PCR扩增，所述核酸分子引物为：
C50F：5’-CTGTCGCAGATATAGATGTAGA-3’
C50R：5’-CTTGAGGAGCCAGAGTGT-3’；
S3：对步骤S2的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
2.根据权利要求1所述的鉴别粘盖乳牛肝菌的方法，其特征在于，步骤S2中的PCR扩增反应体系包括以下体积百分比的组分：
5U/μL Taq DNA聚合酶： 2%
10μmol/L上游引物C50F： 2%
10μmol/L下游引物C50R： 2%
10× Buffer： 10%
2 mmol/L dNTP： 10%
25 mmol/L MgCl2： 6%
1-10μg/ml DNA模板： 2%
ddH2O：余量。
3.根据权利要求2所述的鉴别粘盖乳牛肝菌的方法，其特征在于，步骤S2中的PCR扩增反应体系的总体积为50 μL。
4.根据权利要求1所述的鉴别粘盖乳牛肝菌的方法，其特征在于，步骤S2中的PCR扩增条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；最后72℃延伸10min，产物保存4℃保存备用。
5.根据权利要求1所述的鉴别粘盖乳牛肝菌的方法，其特征在于，步骤S3中，若样品的电泳结果中出现245 bp片段，则鉴定样品为粘盖乳牛肝菌。
6.PCR检测试剂盒在鉴定粘盖乳牛肝菌中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括核酸分子引物C50F和C50R，其DNA序列为：
C50F：5’-CTGTCGCAGATATAGATGTAGA-3’
C50R：5’-CTTGAGGAGCCAGAGTGT-3’。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，PCR扩增反应体系包括以下体积百分比的组分：
5U/μL Taq DNA聚合酶： 2%
10μmol/L上游引物C50F： 2%
10μmol/L下游引物C50R： 2%
10× Buffer： 10%
2 mmol/L dNTP： 10%
25 mmol/L MgCl2： 6%
1-10μg/ml DNA模板： 2%
ddH2O：余量。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，PCR扩增反应体系的总体积为50μL。
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