[发明专利]一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽及制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽及制备方法和应用。抗菌肽F6的序列如SEQ ID No.1所示。本发明以人髓化分样蛋白MD‑2的119‑132片段为基础片段，利用亮氨酸定点突变技术，构建出靶向革兰氏阳性菌的抗菌肽F6。在最小抑菌浓度试验和单细菌培养体系抗菌试验中，本发明的F6多肽表现出了极强的抗金黄色葡球菌的抗菌能力，无革兰氏阴性菌能力。在混合体系的选择性杀菌试验中，F6可以优先地杀灭金黄色葡萄球菌，对大肠杆菌几乎无影响，表明其作为特异性抗革兰氏阳性菌抗菌药物及作为特异性抗革兰氏阳性菌多肽分子探针的潜力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽及制备方法和应用。

背景技术

人类身体中共生着大量的微生物，现有研究已经表明共生微生物与人类生命活动息息相关。目前，抗生素的滥用使得细菌耐药性问题受到重视。抗菌肽作为一类小分子的抗菌物质，由于独特的抗菌机制，被认为是较为优秀的抗生素替代物。然而，正是由于其独特的抗菌机制，抗菌肽对益生菌仍具有作用，容易造成微生物区系平衡失调，造成机体损伤。因此，对特异性病原菌具有特异杀灭能力的抗菌肽，极具应用前景。除此之外，由于缺少能够移除特异性微生物的生物探针，了解特异微生物在微生物群落中所起的作用是十分困难的。现有的人源MD-2的119-132片段对于革兰氏阳性菌无抗菌能力，只对革兰氏阴性菌有抗菌能力，金黄色葡球菌属于革兰氏阳性菌，现需要一种能够移除特金黄色葡球菌的生物探针，用于了解金黄色葡球菌在微生物群落中所起的作用。

发明内容

基于以上不足之处，本发明提供一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽F6，该抗菌肽是一种能够专门杀灭金黄色葡球菌的靶向抗菌肽。

本发明所采用的技术如下：一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽F6，序列如SEQ IDNo.1所示。

本发明还公开一种靶向金黄色葡球菌的抗菌肽F6的制备方法，步骤如下：

(1)选取人的髓化分样蛋白MD-2的119-132片段，采用定点氨基酸突变方法，利用亮氨酸替代第二位置丝氨酸、第四位置的赖氨酸和第七位置的赖氨酸；

(2)采用固相化学合成法通过多肽合成仪得到肽树脂，将得到的肽树脂经过TFA切割后，得到抗菌肽F6；

(3)经过反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定后，即完成抗菌肽F6的制备。

本发明还公开一种靶向金黄色葡球菌抗菌肽F6在制备专门消除金黄色葡球菌的特异性的多肽分子探针中的应用。

本发明的有益效果及优点：本发明的抗菌肽F6，对金黄色葡球菌具有很强的抗菌能力，对革兰氏阴性菌抗菌能力弱。同时，在金黄色葡球菌和大肠杆菌的混合培养体系中，F6可以有效地杀灭金黄色葡球菌，对大肠杆菌的影响较小。本发明的抗菌肽F6可作为特异性的多肽分子探针，用于研究金黄色葡球菌在微生物群落中的作用。

附图说明

图1是抗菌肽F6在单细菌体系中对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生存率的影响对比图；

图2是抗菌肽F6在革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌混合培养体系中，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生存率的影响对比图；

图3是抗菌肽F6对小鼠巨噬细胞RAW264.7活性的影响图。

具体实施方式

下面举例对本发明做进一步的说明：

实施例1

将人源MD-2的119-132片段，采用定点氨基酸突变技术，利用亮氨酸替代第二位置丝氨酸、第四位置的赖氨酸、第七位置的赖氨酸。F6的序列及理化参数如表1所示。

表1 F6的序列及理化参数

实施例2