[发明专利]一种缓冲液及其在神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒中的应用

说明书

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种缓冲液及其在神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒中的应用。所述缓冲液，包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷、KCl、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、BSA。该缓冲液能够用于制备检测NSE的试剂盒，该试剂盒能够快速、简便地检测人外周血中神经元特异性烯醇化酶的含量，操作简便、能为小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和使用。

技术领域

本发明属于试剂盒制备技术领域，具体涉及一种缓冲液及其在神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒中的应用。

背景技术

神经元特异性烯醇化酶(Neuron-Specific Enolase，NSE)是一种分子量约78000的酸性蛋白酶。NSE是小细胞肺癌的重要标志物之一，可用于鉴别诊断，以及检测小细胞肺癌放疗、化疗后的治疗效果。NSE还可用于神经母细胞瘤和肾母细胞瘤的鉴别诊断，对神经母细胞瘤的早期诊断亦有较高的临床应用价值。

现有技术的检测方法有多种，包括ELISA、FIA、板式化学发光等方法，但在ELISA、FIA、板式化学发光等方法学中NSE的灵敏度和稳定性一直不尽如人意，严重影响了NSE在疾病检测中的应用。且以上方法学的检测时间一般在30分钟-1.5小时之间，检测时间较长，不利于患者诊疗。

如中国专利申请CN 109187971A提供一种神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于体外检测技术领域。该试剂盒包括：链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体和偶联标记物标记的神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体。

中国专利申请CN 106645700A一种快速诊断神经元特异性烯醇化酶试剂盒及其使用方法，该试剂盒包含神经元特异性烯醇化酶标准品、反应缓冲液、清洗液、脂质体复合物、磁性分离试剂。所述的脂质体复合物为内部包裹有联吡啶钌Ru(bpy)32+和纳米金粒子复合物，表面包被有抗神经元特异性烯醇化酶抗体，所述的纳米金粒子为粒径在2～50nm的类球形纳米金。所述的磁性分离试剂由生物素化合的抗神经元特异性烯醇化酶抗体和链霉亲和素包被的磁性微粒制备而成。

但现有技术中均存在检测过程和灵敏度不可兼得的情况。本发明的目的是为了能够快速、简便地检测人外周血中神经元特异性烯醇化酶的含量，而提供的一种操作简便、能为小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和使用。

发明内容

为克服以上技术问题，本发明提供了一种缓冲液，该缓冲液能够用于制备检测NSE的试剂盒，该试剂盒能够快速、简便地检测人外周血中神经元特异性烯醇化酶的含量，操作简便、能为小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和使用。

为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：

一种缓冲液，包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷(Tris)、氯化钾(KCl)、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、牛血清白蛋白(BSA)。

优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4-20份、KCl6-25份、十二水磷酸氢二钠1-6份、硫酸镁0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA 1.0-50份。

优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4.2-15.6份、KCl 8.5-24份、十二水磷酸氢二钠1.2-5.8份、硫酸镁0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA1.0-50份；

优选地，所述缓冲液的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取Tris、KCl、NaH₂PO₄、MgSO₄、海藻糖、牛血清白蛋白，加入到纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值，并定容；

(2)用滤膜进行过滤，即可。