[发明专利]采用BAK、MCL1结合状态预测肿瘤细胞对紫杉醇或S63845敏感性的方法

说明书

本发明公开一种采用BAK、MCL1结合状态预测肿瘤细胞对紫杉醇或S63845敏感性的方法，涉及抗肿瘤技术领域，本发明包括以下步骤：(1)通过预冷的CHAPS裂解液裂解非变性肿瘤细胞，使用MCL1作为诱饵蛋白进行免疫共沉淀得到免疫沉淀复合物，同时留一部分肿瘤细胞通过预冷的CHAPS直接进行蛋白抽提；(2)将免疫沉淀复合物和肿瘤细胞抽提蛋白分别进行分离蛋白，然后进行Western Blot并依次孵育MCL1及BAK抗体，定量；(3)使用WB灰度值进行换算，得到该肿瘤细胞中BAK与MCL1结合率。本发明的优点为：可以通过检测两种蛋白的结合率来预测肿瘤对药物的敏感性，减少检测时间，提高检测效率。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤技术领域，具体涉及一种采用BAK、MCL1结合状态预测肿瘤细胞对紫杉醇或S63845敏感性的方法。

背景技术

在抗癌治疗的过程中，当给予一种抗癌药剂时，生命机体的反应性主要取决于作为药剂靶标的肿瘤细胞对该药剂的敏感性。肿瘤细胞对药物的这种敏感性，对于各种类型的肿瘤细胞通常都有明显的改变。这种敏感性的差异可归因于药物靶分子或与这些分子相关的因子的数量或者质量差异，以及药物抗性的获得等因素。

在药物干预之前，提前预知是否对某种药物敏感，从而有选择性的用药。现有技术往往以直接在抗肿瘤药物中培养肿瘤细胞，检测其凋亡程度而判断。如公开号为CN106755261A的专利申请公开一种肿瘤药敏试验方法，将肿瘤组织以组织块的形式进行三维培养，然后加入化疗药物。这种方法在不同的个体上具有很大的差异，而且建立细胞系的时间较长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于现有技术中预测肿瘤对药物敏感性的方法在不同的个体上具有很大的差异，而且建立细胞系的时间较长，提供一种提高预测效率的方法。

本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题：

一种采用BAK、MCL1结合状态预测肿瘤细胞对肿瘤药物敏感性的方法，包括以下步骤：

(1)通过预冷的CHAPS裂解液裂解非变性肿瘤细胞，使用MCL1作为诱饵蛋白进行免疫共沉淀得到免疫沉淀复合物，同时留一部分肿瘤细胞通过预冷的CHAPS直接进行蛋白抽提，得到肿瘤细胞抽提蛋白；所述肿瘤细胞包括紫杉醇或S63845；

(2)将步骤(1)中的免疫沉淀复合物和肿瘤细胞抽提蛋白分别进行分离蛋白，然后进行Western Blot并依次孵育MCL1及BAK抗体，定量；免疫沉淀复合物Western Blot后的灰度值分别为Co-IP(BAK)以及Co-IP(MCL-1)，肿瘤细胞抽提蛋白Western Blot后的灰度值分别为Protein(BAK)以及Protein(MCL-1)；

(3)使用WB灰度值进行换算，得到该肿瘤细胞中BAK与MCL1结合率；

有益效果：随着BAK与MCL1结合率的增加，肿瘤细胞对紫杉醇和S63845药物的敏感性更高。采用本发明中的方法可以通过检测两种蛋白的结合率来预测肿瘤对紫杉醇和S63845药物的敏感性，减少检测时间，提高检测效率。

优选地，所述肿瘤细胞包括卵巢癌细胞。

优选地，所述卵巢癌细胞包括A2780、Kuramochi、PEO1、SKOV3、COV362、OVCAR8、HO8910、OVCAR5、OVISE、DOV13、HeyA8、PA1或OV90。

优选地，所述CHAPS裂解液包括1％CHAPS、150mM NaCl溶液、20mM HEPES和1％丙三醇。

本发明的优点在于：随着BAK与MCL1结合率的增加，肿瘤细胞对药物的敏感性更高。采用本发明中的方法可以通过检测两种蛋白的结合率来预测肿瘤对药物的敏感性，减少检测时间，提高检测效率。