[发明专利]一种复合微生物制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种复合微生物制剂，其特征在于，包含酿酒酵母和嗜麦芽寡养单胞菌；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia₎的活菌数比为1：2至2：1；

所述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia₎为中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏的保藏编号为CGMCC NO.13905的菌株。

2.根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，酿酒酵母和嗜麦芽寡养单胞菌的活菌数比为1：1。

3.一种制备权利要求1-2任一所述的复合微生物制剂的方法，其特征在于，所述复合微生物制剂的制备方法包括如下步骤：

(1)制备发酵液，将活化后的酿酒酵母和嗜麦芽寡养单胞菌分别接种到发酵培养基中发酵制备得到发酵液；

(2)将两株菌的发酵液复配。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括如下步骤：将发酵液离心，除去上清液，收集湿菌体，重悬菌体得菌液，按比例将两株菌的菌液进行复配。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括菌种活化培养的步骤：分别挑取酿酒酵母和嗜麦芽寡养单胞菌菌株，接种到活化培养基中进行活化，即得活化后的酿酒酵母和嗜麦芽寡养单胞菌；

所述活化培养基为PDA培养基；活化培养时间为12h至72h；

步骤(1)中，酿酒酵母发酵培养基含有：K₂HPO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，KCl 0.5g/L，NaNO₃ 3g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，蔗糖30g/L；嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养基含有：KNO₃1.0g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，NaCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，麦芽糖1g/L；所述的发酵条件为：在25℃至35℃、150-200rpm发酵12至36小时。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，离心条件为：8000rpm-12000rpm；离心时间为5至15min。

7.根据权利要求4至6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中菌液复配的具体步骤为：调节两菌株菌液中的菌体浓度一致，然后将两种菌液按体积比为1：2至2：1的比例进行复配，即得复合微生物制剂。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，调节后两菌株的菌液OD₆₀₀均为0.8或调节后两菌株菌液中菌体浓度为10⁶cfu/ml。

9.权利要求1或2所述的复合微生物制剂，或权利要求3-8任一项所述方法制备得到的复合微生物制剂在烟叶发酵和/或提高烟叶的香气品质中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，按烟叶与复合微生物制剂的比为20g：1ml至5g：1ml，将复合微生物制剂均匀喷洒至烟叶表面；所述烟叶为复烤后烟叶；烟叶等级为如下任一一种：

1)上部烟叶；

2)中部烟叶；

3)下部烟叶；

4)包含上述1)-3)中任意2种或2种以上的混合等级烟叶。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，烟叶喷洒微生物制剂后，放置于25℃-35℃、发酵12小时-48小时。