[发明专利]双壳类水产中石房蛤毒素的液质联用检测法

说明书

本发明提供一种双壳类水产中石房蛤毒素的液质联用检测法，包括如下步骤：样品的提取，得到提取液；样品的净化，得到样品检测液；样品的检测：将所述样品检测液进行液相色谱‑串联质谱检测。本发明属于食品安全检测技术领域，本发明提供的液质联用检测法，在提取目标成分的同时有效避免了基质效应的影响，提高了检测灵敏度和准确性，同时，简化了操作步骤，减少了有机溶剂的使用和排放，环境效益好。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，尤其涉及一种双壳类水产中石房蛤毒素的液质联用检测法。

背景技术

贝类毒素是海洋毒素中对人类健康影响最大的一大类毒素的总称，其主要是由水体中产毒藻类或微生物通过食物链的传递，富集在双壳类、鱼、虾、蟹等水产中，食用这些水产对人体健康有潜在的危害风险。贝类毒素按照中毒症状可分为麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning，PSP)、腹泻性贝类毒素(diarrhetic shellfishpoisoning，DSP)、神经性贝类毒素(neurotoxic shellfish，NSP)、记忆缺失性贝类毒素(amnesic shellfish poisoning，ASP)四大类。其中，PSP的危害最大、分布范围最广、事故发生频率最高，由其引发的死亡事件每年超过2000起，并呈逐年上升趋势。

PSP是四氢嘌呤的三环化合物，易溶于水，对热和酸具有较好的稳定性，其基本结构式为：根据R₁、R₂和R₃等基团的不同，可将PSP分为四大类：1)氨基甲酸酯类毒素，包括石房蛤毒素(STX)等；2)脱氨甲酰基类毒素，包括dcGTX1-4等；3)N－磺酰氨甲酰基类毒素，包括C1-4等；4)脱氧脱氨甲酰基类毒素，包括DodcSTX等。石房蛤毒素(STX)是PSP中占比最大(通常＞85％)的毒素，对PSP的研究和检测通常以石房蛤毒素为代表。监测水产中的PSP的含量及评估其危害风险关系着老百姓的健康安危、海域水体环境污染状况及水产行业的健康发展，而解决这些问题的关键是建立一套准确、灵敏、可靠的检测方法。

目前，国内外检测PSP的方法主要有生物小鼠法、酶联免疫法、高效液相色谱法和液质联用法。液质联用法是将液相色谱的分离作用和质谱对目标物分子准确定性定量相结合的检测技术，具有重复性好、准确性好等优点，近年来在贝类毒素等生物毒素检测领域得到越来越广泛的应用。影响液质联用法检测灵敏度和准确度的重要因素是样品前处理的提取效果，样品经前处理后倘若无法有效提取出目标化合物并除去基质中的部分干扰组分，将会严重影响到检测方法的灵敏度和回收率，用于检测不同类型的样品时，需要用样品基质工作曲线来进行匹配校准，不仅操作繁琐，而且检测结果也不够准确。

《食品安全国家标准贝类中麻痹性贝类毒素的测定》(GB5009.213-2016)规定了贝类中麻痹性贝类毒素测定的小鼠生物法、酶联免疫吸附方法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法，液相色谱-串联质谱法的原理为：试样经甲酸溶液(0.5％)提取，分别经乙酸乙酯和三氯甲烷液-液分配去脂，固相萃取柱净化后，再经乙腈除蛋白，超滤离心，液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。《食品安全国家标准贝类中麻痹性贝类毒素的测定》中公开的液质联用法，在样品前处理后并不能有效除去基质中的杂质，仍然有较大的基质抑制效应，对于测定不同种类的样品需要用基质标准曲线进行校准，不仅操作不便，而且容易影响检测的灵敏度和准确度；此外，该方法需要消耗较多的乙酸乙酯等有机溶剂，且除脂步骤较为繁琐。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种双壳类水产中石房蛤毒素的液质联用检测法，对样品的提取、净化和检测条件进行了改进，在提取目标成分的同时有效避免了基质效应的影响，提高了检测灵敏度和准确性，同时，简化了操作步骤，减少了有机溶剂的使用和排放，环境效益好。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。