[发明专利]M2型骨髓巨噬细胞外泌体及其应用、脊髓损伤治疗制剂

说明书

本发明公开了一种M2型骨髓巨噬细胞外泌体及其应用、脊髓损伤治疗制剂，属于脊髓损伤治疗技术领域。本发明高表达OTULIN蛋白的M2型骨髓巨噬细胞外泌体可以发挥改善脊髓损伤后局部缺血缺氧环境，促进血管再生的作用，更加利于神经再生以及局部组织的存活。通过与光固化水凝胶结合形成外泌体缓释系统应用于脊髓损伤局部，提高了外泌体治疗效率，避免了被肝肾代谢，并可持续缓释实现长时间作用，显著改善了小鼠脊髓损伤后的功能恢复。

技术领域

本发明属于脊髓损伤治疗技术领域，具体涉及一种M2型骨髓巨噬细胞外泌体及其应用、脊髓损伤治疗制剂。

背景技术

脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病，全球发病率为每年每百万人口15-40例，中国现有创伤性脊髓损伤患者超过200万，每年新增10-14万，高于全球发病率。脊髓是大脑和外周神经系统之间信息沟通的主要桥梁，损伤发生后将导致其运动、感觉和自主神经功能丧失，往往严重致残，甚至引起死亡，不仅消耗巨大的医疗资源，也给个人、家庭和社会带来沉重的经济负担。目前对于伴有严重神经功能障碍的患者仍无有效的治疗方法。

外泌体是细胞分泌的外囊泡，其中包含多种不同的蛋白质和miRNAs，这些货物被输送到周围细胞或携带到远端细胞，以调节生物过程。不同细胞来源的外泌体，其作用也不尽相同。外泌体治疗具有诸多优势，良好的生物相容性、特异的靶向性以及低免疫原性使其成为良好的治疗载体，目前外泌体治疗的巨大潜力已引起了人们的极大关注，选择合适的细胞来源以获得相应的外泌体显得尤为重要。针对脊髓损伤治疗的外泌体主要来源于不同类型的干细胞，通过干细胞外泌体的促神经再生作用在一定程度上改善脊髓损伤后功能恢复，但是神经的再生与局部微环境密切相关，在局部缺血缺氧的情况下其再生能力也往往受限，目前尚无以针对脊髓损伤后血管再生治疗为主的外泌体产品。

此外，系统性注射的外泌体往往会随血液到达肝肾，并被代谢，仅有少部分到达目标部位发挥治疗作用，局部外泌体给药仅能在早期维持较高效应浓度，难以长期持续性发挥效应。

综上，目前仍缺乏一种针对脊髓损伤后促进血管再生的外泌体，并且利用该种外泌体进行持续性给药治疗脊髓损伤。

本发明克服了现有的技术缺陷，制备了一种高表达OTULIN蛋白的M2型骨髓巨噬细胞外泌体即hiOTULIN-M2-Exos，可以发挥改善脊髓损伤后局部缺血缺氧环境，促进血管再生的作用，更加利于神经再生以及局部组织的存活。通过与光固化水凝胶结合形成外泌体缓释系统应用于脊髓损伤局部，提高了外泌体治疗效率，避免了被肝肾代谢，并可持续缓释实现长时间作用，显著改善了小鼠脊髓损伤后的功能恢复。

发明内容

本发明旨在克服现有技术缺陷，提供一种M2型骨髓巨噬细胞外泌体及其在制备脊髓损伤治疗制剂中的应用，以及制备得到的脊髓损伤治疗制剂。该外泌体可显著促进损伤脊髓中的血管再生，改善运动功能恢复。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种M2型骨髓巨噬细胞外泌体，是由M2型骨髓巨噬细胞分泌得到的。

所述的外泌体含有特异性标志物，包括CD63、CD9和TSG101，并且首次发现该外泌体高表达OTULIN蛋白。该蛋白在外泌体中的富集程度为M2型骨髓巨噬细胞中的7.22±0.06倍。

所述的M2型骨髓巨噬细胞外泌体即hiOTULIN-M2-Exos，是通过分离并培养原代骨髓巨噬细胞，诱导为M2型巨噬细胞；然后用含有无外泌体血清的完全培养基孵育，利用差速离心法收集得到。