[发明专利]大麦条纹病致病性基因Pgr07060及其应用

说明书

本发明提供大麦条纹病致病性基因Pgr07060及其应用，该基因来自麦类核腔菌Pyrenophora graminea。大麦条纹病属系统侵染性真菌病害，是大麦的主要病害之一，其病原菌主要有有性阶段和无性阶段，在世界各大麦种植区域均有分布，并且在上海、四川、浙江和江苏等长江流域地区受到严重危害。本发明通过RNA干扰技术获得Pgr07060干扰突变株，进一步提供了该基因参与调控菌株生长分化，为阐明大麦条纹病菌的致病机理、丰富植物病原菌的基因功能、大麦抗病新防治策略和抗病育种提供理论和现实意义。

技术领域

本发明属于分子生物工程领域，具体涉及大麦条纹病菌致病性基因Pgr07060的生物信息学分析及其调控菌丝生长速率；干扰该基因可降低大麦条纹病的致病性的应用。

背景技术

大麦条纹病(Barley leaf stripe)属系统侵染性真菌病害，主要引起大麦叶部病害。该菌属半知菌亚门真菌(Deuteromycotina)，是一种通过种子传播的病原菌，在受感染的大麦植株中系统性传播，受到感染的大麦植株整株均可发病。该病原菌主要有有性阶段和无性阶段，有性阶段为麦类核腔菌[Pyrenophora graminea(Rabenk.)Ito et Kurib.]，无性阶段为禾内脐蠕孢[Drechslera graminea(Rabenh.ex Sch1.)Shoemaker，在自然界中常见到的是其无性阶段，有性阶段比较少见。大麦条纹病主要通过种子带菌进行传播，主要危害植物的叶片、叶鞘和茎秆部位，大麦种子萌发时，菌丝在种皮与内颖之间或在种皮内存活，有时在种皮和蛋白质层中形成菌丝，在幼苗中建立系统感染。

本研究以大麦条纹病强致病力菌株QWC为材料，以基因组测序结果为基础，筛选出与大麦条纹病菌效应基因Pgr07060，并对其分离克隆，通过基因干扰的方法研究其功能，并从菌丝的形态、显微结构和致病性方面验证其相关功能，明确效应蛋白Pgr07060在大麦条纹病菌中致病性的功能机制，为阐明大麦条纹病菌的致病机理、丰富植物病原菌的基因功能、大麦抗病新防治策略和抗病育种提供理论和现实意义。

现有技术存在的问题：现有技术中未见大麦条纹病(麦类核腔菌)Pgr07060基因及RNA干扰该基因应用的报道。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明提供了一种大麦条纹病(麦类核腔菌)致病性基因Pgr07060，以应对该病害靶标基因的需求，运用RNA干扰技术获得Pgr07060干扰突变体，并从菌丝的形态、显微结构和致病性方面验证其相关功能，明确效应基因Pgr07060在大麦条纹病菌中致病性的功能机制为了达到上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

1.一种大麦条纹病(麦类核腔菌)致病性基因Pgr07060，该基因全长序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一种大麦条纹病(麦类核腔菌)致病性基因Pgr07060获取方法，包括：

(1)大麦条纹病菌株的培养

制备PDA培养基：将新鲜马铃薯削皮去芽眼切成2cm²的小方块，称取重量200g，加1.2L蒸馏水煮沸20-30min，过滤去残渣，在滤液中加入20g葡萄糖和17g琼脂，玻璃棒搅拌混匀，加蒸馏水定容至1L，高压蒸汽灭菌，倒平板；将4℃保存的大麦条纹病菌菌株QWC用直径为5-10mm的打孔器在边缘打取菌饼置于PDA培养基平板上生长7d。

(2)Pgr07060基因的克隆