[发明专利]一种SARS-CoV-2抗体的检测方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒抗体的免标记检测方法。本发明方法通过在光纤端面修饰抗SARS‑CoV‑2抗体，样本中的SARS‑CoV‑2抗体与光纤端面的SARS‑CoV‑2抗体结合，光纤端面处的折射率由于两种抗体的特异性结合而增大，通过检测光纤内光强的变化达到检测目的。本发明所需的样品量极少，操作简单，准确性高，可对两种新冠抗体进行特异性检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种SARS-CoV-2抗体的检测方法。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)具有高传染性和致病性，爆发后便迅速传播，引发了全球性的公共卫生问题，及时准确的检测病毒核酸和抗体对疫情控制有着重要意义。目前，针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测的常用方法主要有：病毒核酸实时聚合酶链反应法、酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法、测流免疫分析法等。

病毒核酸实时聚合酶链反应法是临床诊断新冠病毒患者的常用方法，被称为“金标准”，但采用这种方法进行测试，由于采样过程和样品保存问题，检测结果常常产生不可避免的“假阴性”和“假阳性”。而新型冠状病毒感染诱导产生的抗SARS-CoV-2免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)等抗体的血清检测学具有高灵敏度、特异性和稳定性，可作为核酸检测有效的互补方法。常用的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体的检测试剂盒，如酶联免疫分析(ELISA)、化学发光酶免疫分析(CLIA)和测流免疫分析(LFIA)试剂盒可用于特异性检测SARS-CoV-2抗体。其中酶联免疫吸附法(ELISA)检测对设备要求较低，不需要大型的仪器设备，可实现对新冠抗体的定量检测，但该方法的操作步骤较为繁琐，检测周期较长；化学发光酶免疫分析(CLIA)也可实现对新冠抗体的定量检测，但该方法需要昂贵复杂的仪器和专业的操作人员；测流免疫分析(LFIA)虽可以快速得到检测结果，但该方法仅可定性或半定量的分析抗体的浓度而无法准确的检测抗体浓度，因此，迫切地需要开发一种快速、简单、灵敏的血清学检测技术用于新型冠状病毒肺炎的临床诊断。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型冠状病毒抗体的免标记检测方法，更加简便、准确、微量的实现SARS-CoV-2免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)的血清学免疫定量检测方法，以解决现有的化学发光酶免疫分析(CLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测新冠抗体的耗时长、操作复杂等缺点和不足。本发明所需的样品量极少，操作简单，准确性高，可对两种新冠抗体进行特异性检测。

第一方面，本发明提供了一种功能化光纤探针。

本发明所提供的功能化光纤探针是按照包括下述步骤的方法制备得到的：

a)采用多模光纤作为检测探针，去除光纤表面涂覆层，将光纤两端磨平并抛光；

b)将光纤端面置于V(H₂SO₄):V(H₂O₂)＝3：1的食人鱼溶液中进行反应，反应结束后用超纯水将光纤洗净烘干；

c)将步骤b)的光纤一端的端面置于MTS(对甲苯磺酸甲酯)的甲苯溶液中浸泡，反应结束后洗净吹干；

d)将步骤c)处理的光纤的端面置于GMBS(4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯)乙醇溶液中浸泡，反应结束后将光纤洗净备用。

e)将步骤d)处理的光纤的端面浸泡在抗SARS-CoV-2抗体(即二抗，为针对SARS-CoV-2抗体的特异性抗体)溶液中，于4℃冰箱中反应过夜，反应结束后使用超纯水清洗光纤；

f)用BSA溶液封闭光纤端面未反应的位点2小时，制作成SARS-CoV-2 IgG功能化检测光纤或SARS-CoV-2 IgM功能化检测光纤。

上述方法步骤a)中，所述多模光纤的直径可为400～600微米，光纤数值孔径为0.18～0.22。所述光纤的长度可为3-5厘米。