[发明专利]一种用于分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞的芯片

说明书

一种用于分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞的芯片，本发明提供一种微流控芯片用于从外周血中分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞，通过免疫荧光试剂对捕获的细胞进行标记，进而通过荧光显微镜对捕获的细胞进行鉴定。本发明的有益效果如下：1)、按临界分选尺寸排列的微流控多组微柱阵列结构能够避免滤膜的堵塞问题。2）、尤文肉瘤CTC的表面抗原能与CD99抗体在芯片捕获区内发生特异性抗原‑抗体结合，鱼骨结构使流体产生涡旋，增加CTC被抗体捕获的能力。3）、血液样本不需要红细胞裂解和密度梯度离心等影响细胞活性的前处理操作，且细胞在微柱阵列和鱼骨凹槽内所受的剪切力较小，因此能很好的保持细胞的活性。

技术领域

本发明涉及一种微流控芯片，具体来说，涉及一种用于分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞的芯片。

背景技术

尤文肉瘤（Ewing sarcoma, ES）是一种少见的小圆细胞恶性肿瘤，属于尤文氏肉瘤家族肿瘤。它占所有原发性骨肿瘤的6%～8%，是儿童和青少年最常见的恶性原发性骨肿瘤。这类肿瘤恶性程度高、易复发、预后差。发生部位常在骨盆、胸壁和腿，但也可能发生在身体的其它部位。临床表现主要是局部疼痛、肿胀，也可伴有发烧、乏力和消瘦，影像学检查显示肿瘤呈溶骨性虫蚀样破坏，骨膜反应为“放射状”或“洋葱皮”样。组织活检为诊断的重要依据，影像学有助于判断肿瘤的分期和预后。大约20%-25%的患者在确认时就已经出现转移，转移部位多见于肺、骨髓以及颅内。目前，尤文肉瘤的组织学起源尚不清楚，但通常认为其起源于骨髓间充质干细胞。EWSR1-FLI1融合基因存在于90％的尤文肉瘤患者中，这是尤文肉瘤的特征。另一个特征是细胞表面高度表达糖蛋白MIC2（CD99），因此MIC2的表达可用于辅助鉴别诊断小圆形细胞肿瘤。

组织活检存在给患者带来很大痛苦、不能频繁操作、只能对单一器官进行检测、容易激发癌细胞快速增长等许多局限。而液体活检不仅可以大幅缩短癌症确认时间，而且可以对癌症患者的治疗情况进行随时跟踪，真正实现“个性化精准治疗”。循环肿瘤细胞（CTC）是近年来研究应用的几个新型肿瘤分子标志物之一。通过检测CTC数量和蛋白表达可对肿瘤进行确诊、判断预后、监控疗效。例如，当CTC出现上皮间质转换（EMT）、过表达上皮细胞粘附分子往往提示肿瘤患者预后不佳；通过对比手术或放化疗前后血液中CTC数量，可以判断治疗是否有效，具有重要的临床研究及应用价值。

发明内容

本发明提供一种微流控芯片用于从外周血中分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞，通过免疫荧光试剂对捕获的细胞进行标记，进而通过荧光显微镜对捕获的细胞进行鉴定。

一种用于分离捕获尤文肉瘤循环肿瘤细胞的芯片，其特征在于，所述的芯片包括有血液入口、用于去除大部分血细胞的第一级富集区、位于所述的第一级富集区下游并与之相连通的用于捕获尤文肉瘤CTC的第二级捕获区和废血出口；所述的第一级富集区和第二级捕获区由玻璃基底和设于玻璃基底上方的聚合物层组成，所述的第一级富集区内设有三组或三组以上的串联的富集微柱阵列结构，所述的第二级捕获区的玻璃基底上修饰有特异性捕获尤文肉瘤CTC的CD99抗体，第二级捕获区的聚合物层上设有V字形鱼骨凹槽结构；所述的V字形鱼骨凹槽结构和玻璃基底之间形成有流体通道。