[发明专利]羊口疮病毒抗体捕捉剂及其试剂盒和检测方法与应用

说明书

本发明属于生物免疫学检测领域，具体涉及一种基于羊口疮病毒B2L、F1L截短融合蛋白的羊口疮病毒抗体捕捉剂及其试剂盒和检测方法与应用。编码所述羊口疮病毒抗体捕捉剂的核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列，其0.25μg/mL浓度包被的固相载体的ELISA试剂盒检测羊口疮病毒的方法还包括：将待检测血清按照1:200倍数稀释作为一抗孵育1h，洗涤；然后加入稀释倍数1:8000±50的辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG作为二抗孵育1h，洗涤。该羊口疮病毒抗体捕捉剂及其试剂盒和检测方法对羊口疮病毒特异性强，检测灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物免疫学检测领域，具体涉及一种基于羊口疮病毒B2L、F1L截短融合蛋白的羊口疮病毒抗体捕捉剂及其试剂盒和检测方法与应用。

背景技术

羊传染性脓疱皮炎，又名羊传染性口炎，俗称“羊口疮”，是由羊口疮病毒(orfvirus，OrfV)感染山羊或绵羊所引起的一种急性、嗜上皮性的人兽共患传染病，我国将其列为三类动物传染病。该病传染性强，发病率高，主要以接触性感染为主，感染羊只以口唇、鼻镜等皮肤部位出现红斑、脓疱、结痂等病变为特征，严重影响羊只采食，导致羊消瘦、免疫力低下，继发感染其他病原体，从而导致发病羊死亡率升高，严重阻碍了养羊业的发展。羊口疮在我国多地流行，主要分布于我国的东北、西南等养羊地区，如新疆、吉林、云南、贵州等地都有羊口疮的流行报道。随着养羊业的发展，规模化养羊加速了羊口疮的传播，同时对养羊业的经济发展影响愈发严重。

赵魁.羊传染性脓疱病毒重组DNA疫苗的构建与实验免疫研究[D].吉林大学,2010.成功构建了pCDNA3.1-ORFV 011(B2L)、pCDNA3.1-ORFV 059(F1L)和pCDNA3.1-ORFV011(B2L)-linker-ORFV(F1L)疫苗质粒；通过小鼠试验证明了pCDNA3.1-ORFV011(B2L)-linker-ORFV(F1L)疫苗质粒免疫效果优于pCDNA3.1-ORFV 011(B2L)、pCDNA3.1-ORFV 059(F1L)疫苗质粒。刘嫒.IL-2基因佐剂对羊口疮病毒核酸疫苗免疫效果的影响研究[D].贵州大学,2016成功构建真核表达质粒pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L和pVAX1-B2L，李婷.羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达及诱导小鼠免疫原性研究[D].贵州大学,2019.成功构建真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L，并通过免疫小鼠证明其具有良好的免疫原性。冯平,李云章,孙丰廷,等.羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2018,46(06):1-8.等通过将B2L和F1L基因串联，并在昆虫杆状病毒表达系统成功获得了部分分泌型的B2L和F1L串联重组蛋白。陈晓.上海株OrfV双基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究[D].锦州医科大学,2018.以腺病毒为载体，构建能串联表达F1L和B2L蛋白的重组腺病毒，并通过小鼠免疫试验进行免疫效果评价。

OrfV主要感染山羊和绵羊，以感染羔羊为主，但也有感染其他动物的报道，如犬、猫等，也可感染人，且感染宿主在不断扩大，是一种人兽共患传染病，威胁公共卫生安全。OrfV变异较强，因此，防控该病及其传染十分困难，在羊群中与羊相关的食源的羊口疮病毒检测是有必要的，通过抗体诊断或流行病学调查可以判断该地方的OrfV感染和流行现状，从而制定有效的防控措施。间接ELISA方法是检测OrfV抗体的重要手段，但由于目前商品化的试剂盒检测效果较差，易出现假阴性和假阳性，因此，建立一种检测OrfV抗体的间接ELISA方法非常有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明在于提供一种羊口疮病毒抗体捕捉剂及包含其的羊口疮病毒ELISA检测试剂盒。该试剂盒检测灵敏度高，特异性强。

所述羊口疮病毒抗体捕捉剂与所述羊口疮病毒抗体特异性结合，编码所述羊口疮病毒抗体捕捉剂的核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列。所述羊口疮病毒抗体捕捉剂的氨基酸序列包括如SEQ ID NO.2所示的序列。